本文關(guān)鍵詞：溫敏性N-異丙基丙烯酰胺—丙烯胺共聚物及其胍基衍生物非病毒基因載體　出處：《天津大學(xué)》2006年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】： 本工作采用自由基聚合制備了N-異丙基丙烯酰胺(NIPAAm)與丙烯胺(AAm)的無(wú)規(guī)共聚物(PNI-AAM),進(jìn)一步將共聚物胍基化改性,生成胍基衍生物(PNI-AAM-G),并將其用于非病毒轉(zhuǎn)基因載體。主要內(nèi)容包括以下四部分: (1)以1H NMR及13C NMR確認(rèn)了PNI-AAM與PNI-AAM-G兩種共聚物的生成,元素分析結(jié)果表明產(chǎn)物具有較高的純度。濁度法檢測(cè)了共聚物溶液的LCST,表明隨著AAM含量以及胍基化程度的增加,LCST不同程度的升高,最小LCST約為38℃。 (2)研究共聚物與DNA的相互作用情況,并考察共聚物結(jié)構(gòu)和溫度對(duì)其的影響。變溫電泳和變溫紫外結(jié)果表明,共聚物載體能有效縮合質(zhì)粒DNA形成復(fù)合物,溫度升高對(duì)于LCST相對(duì)較低的1-1系列聚合物的復(fù)合效果影響較為明顯,各載體復(fù)合DNA的能力為:PNI-AAM 1-3 PNI-AAM-G 1-3 PNI-AAM 1-1 PNI-AAM-G 1-1。粒度檢測(cè)和TEM觀測(cè)考察了復(fù)合物的尺寸和形態(tài),結(jié)果顯示復(fù)合物基本為均勻的納米粒子,粒徑與載體復(fù)合能力及復(fù)合比成反向關(guān)系。 (3)以C2C12為宿主細(xì)胞,嘗試了四種共聚物載體介導(dǎo)含Luciferase報(bào)告基因質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染,通過(guò)測(cè)定luciferase的活性確定轉(zhuǎn)染效率。結(jié)果表明,PNI-AAM-G 1-3共聚物載體可將pGL3質(zhì)粒成功轉(zhuǎn)入C2C12細(xì)胞內(nèi),總體上的轉(zhuǎn)染率比裸DNA高100～400倍,比PEI高1～5倍,較脂質(zhì)體低1～2個(gè)數(shù)量級(jí),同時(shí)表現(xiàn)了良好的耐血清能力。若能降低此載體的LCST,使其在體溫附近發(fā)生相轉(zhuǎn)變,將有望通過(guò)調(diào)解溫度進(jìn)一步提高轉(zhuǎn)染率。
[Abstract]:The free radical polymerization of N- isopropyl acrylamide was prepared (NIPAAm) and acrylamide (AAm) copolymer (PNI-AAM), the modified copolymer guanidination, generating guanidine derivatives (PNI-AAM-G), which are used for non viral vectors. The main contents include the following four parts:
(1) to 1H NMR and 13C NMR confirmed the formation of PNI-AAM and PNI-AAM-G two kinds of copolymers, the elemental analysis results showed that the product has high purity. The turbidity assay showed that with LCST copolymer solution, the content of AAM and increase the guanidination degree, LCST increased in different degree, the minimum LCST is about 38 degrees Celsius.
(2) the interaction of copolymer and DNA, and the effect of temperature on the copolymer structure and the temperature and ultraviolet. Electrophoresis results showed that copolymer carrier can effectively condensation of plasmid DNA complex formation, effect of temperature effect of composite 1-1 series polymer for LCST relatively low is obvious, ability of the carrier the compound DNA is: PNI-AAM 1-3 PNI-AAM-G 1-3 PNI-AAM 1-1 PNI-AAM-G 1-1. particle size analyzer and TEM at investigated the size and morphology of composites, the results showed that the composite material is basically uniform nanoparticles, particle size and carrier composite and composite ability than a reverse relationship.
(3) with C2C12 as the host cell, try the four kinds of copolymer carrier mediated plasmid with Luciferase gene transfection, the transfection efficiency was determined by measuring the activity of luciferase. The results showed that PNI-AAM-G 1-3 copolymer could successfully transfer pGL3 plasmid into C2C12 cells transfected with the total body rate of 100 ~ 400 higher than that of naked DNA times higher than PEI 1 to 5 times, compared with the liposome as low as 1 to 2 level, while a good serum resistance. If you can reduce the carrier of LCST, the phase transition temperature in the near, is expected to further improve the temperature through the mediation of transfection rate.

【學(xué)位授予單位】：天津大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號(hào)】：R318.08;R346

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1404621