發(fā)布時間：2018-01-07 03:27

  本文關鍵詞：HPV16型E7重組蛋白的表達及其多克隆抗體的制備　出處：《細胞與分子免疫學雜志》2014年02期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：目的制備人乳頭瘤病毒(HPV)16型E7原核表達蛋白及其多克隆抗體。方法用PCR方法從宮頸癌組織中擴增HPV16 E7基因,克隆至pET21a(+)載體并構(gòu)建pET21a(+)/HPV16 E7重組質(zhì)粒,測序鑒定;將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21(DE3),經(jīng)異丙基硫代-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)誘導后表達重組蛋白,用Ni-NTA親和層析法純化并經(jīng)SDS-PAGE及Western blot分析鑒定;純化的HPV16 E7重組蛋白免疫日本大耳白兔制備多克隆抗體,用ELISA檢測多克隆抗體的效價,并用Western blot法及免疫熒光技術分析多克隆抗體的特異性。結(jié)果 HPV16 E7重組蛋白可通過原核表達系統(tǒng)進行表達和純化;通過兔免疫后可制備特異性的多克隆IgG抗體,效價達1∶30 000;經(jīng)Western blot法和免疫熒光染色結(jié)果證實兔多克隆抗體可特異性識別HPV16 E7蛋白。結(jié)論成功進行了HPV16 E7原核表達并制備了HPV16 E7兔多克隆抗體。
[Abstract]:Objective to prepare the human papilloma virus (HPV) type 16 E7 prokaryotic expression protein and its polyclonal antibody. Methods PCR was used to amplify the HPV16 E7 gene from cervical cancer tissue and cloned into pET21a (+) vector to construct pET21a (+) /HPV16 and E7 recombinant plasmid, sequencing; the recombinant plasmid was transformed into E. coli BL21 (DE3), the isopropyl thio beta -D- thio galactopyranoside (IPTG) expression induced by recombinant protein, was purified by SDS-PAGE and Western and blot analysis identified by Ni-NTA HPV16 E7 affinity; recombinant protein immunized rabbits were purified to prepare polyclonal antibody titer detected by ELISA polyclonal antibody the Western and blot method and immunofluorescence analysis of specific polyclonal antibody. Results HPV16 E7 recombinant protein expression system for expression and purification by prokaryotic; by rabbit immunization can be polyclonal antibody preparation of IgG specificity, potency 1: 30000; the results confirmed that the rabbit polyclonal antibody could specifically recognize HPV16 E7 protein by Western blot assay and immunofluorescence staining. Conclusion the successful HPV16 E7 prokaryotic expression and preparation of HPV16 E7 rabbit polyclonal antibody.

【作者單位】： 溫州醫(yī)科大學分子病毒與免疫研究所/微生物學與免疫學教研室;
【基金】：國家自然科學基金(81172463)
【分類號】：R392
【正文快照】： 人乳頭瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染是誘發(fā)宮頸癌的主要因素之一,根據(jù)與宮頸癌的相關性,可將其分為高危型如HPV16、HPV18、HPV33、HPV58等與低危型如HPV6、HPV11等,高危型HPV感染與宮頸癌的發(fā)生密切相關,而低危型HPV則可引起生殖器的尖銳濕疣等。盡管不同類型的HPV型

【參考文獻】

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本文編號：1390794