本文關鍵詞：脂多糖對ECV304細胞增殖、ESM-1表達和THCE細胞緊密連接表達的影響　出處：《安徽醫(yī)科大學》2005年碩士論文　論文類型：學位論文

  更多相關文章： 脂多糖 臍靜脈內(nèi)皮細胞 內(nèi)皮細胞特異性分子-1 增殖 表達 緊密連接 THCE細胞

【摘要】：目的 通過脂多糖(lipopolysaccharide, LPS, 內(nèi)毒素)對人臍靜脈內(nèi)皮細胞(human umbilical vein endothelial cell, HUVEC, ECV304)的生長、內(nèi)皮細胞特異性分子-1(endothelial cell-specific molecule-1, ESM-1)表達和猴病毒40—永生性人角膜上皮[simian virus (SV) 40-immortalized human corneal epithelial, THCE]細胞中的緊密連接(tight junction, TJ)表達的影響來探討其在炎癥反應中的作用。方法 在體外,用LPS在不同時間作用于ECV304。觀察ECV304形態(tài),用MTT法對ECV304增殖情況進行分析,用免疫細胞化學方法觀察ESM-1、胞外信號調(diào)節(jié)激酶(external-signal regulated kinase, ERK)在ECV304中的表達情況,以及ERK的磷酸化情況。用免疫熒光檢測LPS對occludin、ZO-1、ZO-2和claudin-1在THCE細胞中的分布影響,Western blot檢測LPS對occludin、ZO-1和ZO-2在THCE細胞中表達影響,并用伏歐表測定LPS對THCE細胞的跨上皮阻抗(transepithelial electrical resistance, TER)的影響。結(jié)果 加入LPS 24h后ECV304出現(xiàn)形態(tài)變化,48h時改變最為明顯,細胞形態(tài)梭形明顯,排列紊亂。加入LPS后0.5h時,1μl/ml和5μl/ml LPS作用的ECV304增殖大于正常ECV304(P0.05)。加入LPS后1h時,1μl/ml LPS作用的ECV304增殖大于正常ECV304(P0.05)。而2h后,三者無明顯區(qū)別。與正常ECV304相比,LPS處理的ECV304的ESM-1表達明顯增高,在0.5h時表達量增高最明顯,1h時加入5μl/ml LPS的作用高于1μl/ml,在2h后表達量的增高有所下降。LPS對ERK在ECV304中的表達影響不顯著。加入LPS 0.5h～4h期間,均能促進ECV304 ERK磷酸化,在1h和2h時,加入5μl/ml LPS的作用高于1μl/ml,8h后LPS對ERK磷酸化無影響。3μl/ml LPS處理6h的THCE細胞中,occludin、ZO-1和claudin-1在細胞邊界幾乎沒有改變,而ZO-2在細胞邊界幾乎不可見。1μl/ml的LPS處理THCE細胞6h后,ZO-1和ZO-2
[Abstract]:Objective to lipopolysaccharide (lipopolysaccharide, LPS, endotoxin) on human umbilical vein endothelial cells (human umbilical vein endothelial cell, HUVEC, ECV304) on the growth of endothelial cell specific molecule -1 (endothelial cell-specific molecule-1, ESM-1) and the expression of simian virus 40 immortalized human corneal epithelial [simian virus (SV) 40-immortalized human corneal epithelial. Tight junctions in THCE] cells (tight, junction, TJ) expression to explore the influence of its role in inflammation. Methods in vitro, with LPS at different time in ECV304. observation of ECV304 morphology, proliferation of ECV304 was analyzed by MTT method, ESM-1 was observed by immunocytochemical method, extracellular signal regulated kinase (external-signal regulated kinase, ERK) expression in ECV304, and the phosphorylation of ERK. Occludin by immunofluorescence detection of LPS, ZO-1 Effect of distribution of ZO-2 and claudin-1, in THCE cells, Western blot detection of LPS of occludin, the expression of ZO-1 and ZO-2 in THCE cells, and determination of LPS on THCE cell transepithelial impedance voltohmmeter (transepithelial electrical resistance, TER). The effects of the addition of LPS into 24h ECV304 after morphological changes, 48h when the most obvious changes in cell morphology, spindle was disordered. After joining LPS 0.5h, 1 l/ml and 5 l/ml LPS ECV304 ECV304 (P0.05) proliferation is greater than normal. After joining LPS 1H, 1 l/ml LPS ECV304 ECV304 (P0.05) is higher than the normal proliferation and 2H., no significant difference between the three. Compared with the normal ECV304, LPS ECV304 ESM-1 expression was significantly increased, increased the most obvious expression in 0.5h, 1H added 5 l/ml LPS the role of higher than 1 l/ml, the rise of the amount of reduction of.LPS on ERK expression in ECV304 after 2H The expression has no significant effect. During the period of joining the LPS 0.5h ~ 4h, could promote the phosphorylation of ERK in ECV304, 1H and 2H, adding 5 l/ml LPS compared with 1 l/ml, LPS had no effect on ERK phosphorylation.3 l/ml LPS 6h in THCE cells, 8h occludin, ZO-1 and Claudin-1 in the cell boundary has hardly changed, while the ZO-2 in the cell boundary LPS THCE cells treated with 6h almost invisible.1 l/ml, ZO-1 and ZO-2

【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2005
【分類號】：R363

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