本文關鍵詞：日本血吸蟲天然分子編碼基因重組蛋白疫苗rSjHGPRT的安全性評價　出處：《中南大學》2007年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】： 目的本研究旨在通過注射日本血吸蟲天然分子編碼基因重組蛋白疫苗rSjHGPRT分別觀察家兔的皮下注射的局部刺激反應、豚鼠的全身過敏狀況及小鼠的急性毒性作用，初步評價該蛋白分子疫苗的臨床前安全性，為其進一步開發(fā)應用奠定工作基礎。 方法通過IPTG誘導，轉化含SjHGPRT／pQE30的E.coliM15，大量表達rSjHGPRT；采用SDS-PAGE、電洗脫、透析法分離純化重組蛋白；皮下注射家兔，肉眼觀察局部病理改變，顯微鏡下觀察組織病理學變化；接種豚鼠，按規(guī)定的技術原則觀察和評價豚鼠的全身過敏反應；采用最大劑量法，，接種小鼠后觀察其ALT、AST、Cr、BUN和血常規(guī)參數(shù)等反映急性毒性作用的指標。 結果 1、采用IPTG誘導法，大量表達了rSjHGPRT，采用SDS—PAGE，電洗脫和透析等方法成功分離、純化重組蛋白，純化產物經(jīng)細菌學檢測為陰性。 2、家兔皮下注射rSjHGPRT后至72小時，局部無充血，出血，水腫等改變，組織病理學檢查可見注射部位少量炎性細胞浸潤，未發(fā)現(xiàn)水腫、壞死等組織學改變。 3、豚鼠接種rSjHGPRT的全身過敏實驗顯示，實驗組僅一只出現(xiàn)弱陽性過敏反應，且很快緩解，其余豚鼠未見過敏癥狀。 4、小鼠急性毒性實驗過程中，實驗組小鼠未出現(xiàn)明顯的行為異常，進食、飲水及活動與對照組小鼠無明顯差異。小鼠體重變化未出現(xiàn)有統(tǒng)計學意義的改變，檢測實驗小鼠肝、腎功能及血常規(guī)亦未發(fā)現(xiàn)有統(tǒng)計學意義的結果。 結論 1、成功表達、分離、純化了重組蛋白rSjHGPRT。 2、家兔皮下注射rSjHGPRT后局部刺激反應和組織病理學改變。 3、rSjHGPRT接種豚鼠幾乎無全身過敏反應，實驗組中個別動物出現(xiàn)一過性過敏反應癥狀，也能很快自行緩解。 4、接種rSjHGPRT對小鼠無明顯急性毒性作用。
[Abstract]:Objective to observe the local stimuli of subcutaneous injection of Schistosoma japonicum natural molecular encoding gene recombinant protein vaccine (rSjHGPRT) in rabbits. The systemic allergy of guinea pigs and the acute toxicity of mice were evaluated preliminarily to evaluate the preclinical safety of the protein molecular vaccine in order to lay a foundation for its further development and application. Methods E. coli M15 containing SjHGPRT/pQE30 was transformed into E. coli M15 by IPTG, and rSjHGPRT was expressed in large quantities. The recombinant protein was purified by SDS-PAGE, electroelution and dialysis. Local pathological changes were observed by subcutaneous injection of rabbits and histopathological changes were observed under microscope. After inoculating guinea pigs, the systemic allergic reactions of guinea pigs were observed and evaluated according to the prescribed technical principles. The maximum dose method was used to observe the parameters of alt ASTX Cr bun and blood routine to reflect the acute toxicity of mice after inoculation. Results 1. RSjHGPRT was expressed by IPTG induction method. The recombinant protein was purified by SDS-PAGE, electroelution and dialysis. The purified product was negative by bacteriological examination. 2. There were no changes of hyperemia, hemorrhage, edema and so on after subcutaneous injection of rSjHGPRT to 72 hours. Histopathological examination showed a small amount of inflammatory cell infiltration at the injection site, and no edema was found. Necrosis and other histological changes. 3. The systemic allergy test of guinea pigs inoculated with rSjHGPRT showed that only one of the experimental groups had a weak positive allergic reaction, and the other guinea pigs had no allergic symptoms. 4. In the course of acute toxicity test, the mice in the experimental group had no obvious behavioral abnormality, no significant difference in food intake, drinking water and activity, but no significant changes in body weight in the experimental group compared with those in the control group. No significant results were found in liver, kidney function and blood routine examination. Conclusion 1. The recombinant protein rSjHGPRT was successfully expressed, isolated and purified. 2. Local stimulation and histopathological changes after subcutaneous injection of rSjHGPRT in rabbits. 3The guinea pigs inoculated with rSjHGPRT had almost no systemic allergic reaction, and the symptoms of transient allergic reaction appeared in some animals in the experimental group. 4. Inoculation of rSjHGPRT had no obvious acute toxicity in mice.
【學位授予單位】：中南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2007
【分類號】：R392

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