發(fā)布時(shí)間：2017-12-31 15:24

  本文關(guān)鍵詞：抗日本血吸蟲(chóng)SEA雞卵黃抗體的制備與鑒定　出處：《中國(guó)寄生蟲(chóng)學(xué)與寄生蟲(chóng)病雜志》2007年03期 　論文類(lèi)型：期刊論文

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【摘要】：目的制備特異性抗日本血吸蟲(chóng)可溶性蟲(chóng)卵抗原(SEA)的雞卵黃免疫球蛋白(IgY)并檢測(cè)其特異性、敏感性。方法用日本血吸蟲(chóng)SEA經(jīng)翅膀下靜脈和皮下免疫25周齡海蘭母雞4次(首次劑量為60μg/只,加強(qiáng)劑量為30μg/只),每次間隔10d。取免疫前和首次免疫后35d的雞蛋卵黃,分別用水稀釋法提取IgY,BCA法測(cè)定蛋白含量,并進(jìn)行十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)和蛋白質(zhì)印跡(Westernblotting)分析,ELISA檢測(cè)純化后IgY特異性和敏感性。分別提取免疫后不同時(shí)間的卵黃抗體,觀察抗體效價(jià)的變化。結(jié)果海蘭母雞經(jīng)SEA首次免疫后35d,每枚蛋經(jīng)提純后可得到約61mg抗體,經(jīng)SDS-PAGE和Westernblotting分析,純化的IgY有1條主要蛋白帶,相對(duì)分子質(zhì)量(Mr)為130000,并可被SEA識(shí)別。母雞初次免疫后第10天,經(jīng)SDS-PAGE和ELISA分析,雞蛋卵黃內(nèi)即有抗體產(chǎn)生,初次免疫后31d效價(jià)可達(dá)1∶1600。雙抗體夾心ELISA結(jié)果顯示純化后的IgY有較高的敏感性,可檢測(cè)到的SEA達(dá)2.4ng/ml。結(jié)論制備的抗SEA雞卵黃抗體的特異性和敏感性均較高。
[Abstract]:Objective to prepare chicken egg yolk immunoglobulin (IgY) against Schistosoma japonicum soluble egg antigen (SEAA) and detect its specificity. Methods 25-week-old Hailan hens were immunized with Schistosoma japonicum SEA (60 渭 g for the first time and 30 渭 g for each) with subcutaneous and subcutaneous immunization. The egg yolk before immunization and 35 days after the first immunization were collected at intervals of 10 days and the protein content was determined by water dilution method. Sodium 12 alkyl sulfonate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and Western blotting were performed. ELISA was used to detect the specificity and sensitivity of purified IgY. The egg yolk antibody was extracted at different time after immunization and the titer of antibody was observed. The results showed that Hailan hens were immunized with SEA for 35 days. After each egg was purified, about 61mg antibody was obtained. SDS-PAGE and Westernblotting analysis showed that the purified IgY had a major protein band. The relative molecular weight (Mr) was 130000and could be recognized by SEA. On the 10th day after the first immunization of hens, SDS-PAGE and ELISA analysis showed that antibodies were produced in egg yolk. The titer of the purified IgY was 1: 16000.The results of double antibody sandwich ELISA showed that the purified IgY had a high sensitivity. The detectable SEA was 2.4 ng / ml. Conclusion the specificity and sensitivity of anti SEA yolk antibody were higher.
【作者單位】： 華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)系 華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)系 華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)系 華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)系 華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)系 華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)系 華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)系
【基金】：國(guó)家863高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃(No.2006AA02A251)~~
【分類(lèi)號(hào)】：R392
【正文快照】： 血吸蟲(chóng)病的診斷方法主要有病原學(xué)診斷和免疫學(xué)診斷。由于病原學(xué)方法對(duì)慢性病人和低度感染者檢出率低,因此免疫學(xué)診斷方法的建立和改進(jìn)是多年來(lái)血吸蟲(chóng)病診斷的研究熱點(diǎn)。當(dāng)前國(guó)內(nèi)免疫學(xué)診斷主要是檢測(cè)抗體,常用的方法有環(huán)卵沉淀試驗(yàn)(COPT)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)、間接血凝

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1360350