本文關鍵詞：腹腔巨噬細胞對小鼠卵受精率和囊胚形成率的影響　出處：《中國協(xié)和醫(yī)科大學》2006年碩士論文　論文類型：學位論文

  更多相關文章： 體外受精 模型 巨噬細胞 共培養(yǎng) 小鼠卵 受精率 囊胚形成率

【摘要】：腹腔巨噬細胞對小鼠卵受精率和囊胚形成率的影響 近年來子宮內膜異位癥(endometriosis，EM)發(fā)病率不斷上升，約5％～15％的育齡期婦女受其影響，其與不育癥的關系日益成為研究的熱點，但其病因與發(fā)病機制尚未完全闡明，EM患者分泌的腹腔液增多，腹腔液中巨噬細胞數量增多、功能增強，腹腔液和血清中山巨噬細胞分泌的細胞因子也明顯增多，且與病變程度成正比。這些與不育是否有關、關系如何，目前尚不十分清楚。國內外的研究對巨噬細胞對囊胚形成的作用意見不一致。本研究擬通過建立小鼠體外受精模型，觀察巨噬細胞對小鼠卵子受精率和囊胚形成率的影響。 研究目的 一．建立小鼠體外受精模型 二．巨噬細胞對小鼠卵子受精率和囊胚形成率的影響 1．分離、培養(yǎng)及鑒定小鼠腹腔巨噬細胞； 2．昆明小鼠精子提取； 3．昆明小鼠的藥物誘導排卵； 4．昆明小鼠的取卵； 5．小鼠卵子與巨噬細胞體外共培養(yǎng)，觀察其對小鼠卵受精率和囊胚形成率的影響。 研究方法 1．觀察小鼠不同周齡(＜8周，8周～10周，10～14周和＞14周)，不同體重(32克，32克～40克和)40克)，以及促排卵藥物不同劑量(5IU、10IU和15IU)和不同狀態(tài)(冷凍還是新鮮)下，，所取出鼠卵的數量和質量，確定最佳的小鼠狀態(tài)和藥物劑量建立昆明小鼠體外誘導排卵模型。 2．利用冰鹽水對小鼠進行腹腔內注射，誘導腹腔巨噬細胞產生，經分離純化，通過鑒定證明收獲細胞約95％為巨噬細胞備用。 3．通過設立實驗組和對照組，取卵后隨機把卵分成三組：①對照組，進行小鼠卵子單獨培養(yǎng)，培養(yǎng)過程中不與巨噬細胞共培養(yǎng)；②實驗組1：取卵后即與巨噬細胞進行共培養(yǎng)，觀察巨噬細胞作為共培養(yǎng)體系對小鼠卵子受精率和囊胚形成過程的影響；③實驗組2：在受精50小時～55小時后，即在8細胞形成前后與巨噬細胞共培養(yǎng)進行共培養(yǎng)，觀察巨噬細胞作為共培養(yǎng)體系對小鼠受精卵囊胚形成率的影響。 研究結果 1．建立的標準體外受精模型，以昆明小鼠為實驗材料，小鼠最佳周齡是10～14周，體重為32克～40克，所用促排卵藥物以HMG10IU和HCG10IU為最佳，取卵數量最多，質量最好。 2．腹腔誘導的巨噬細胞經過染色證明收獲細胞約95％為巨噬細胞，且一只小鼠腹腔收獲的細胞數目，如果在1個3653培養(yǎng)皿內池中1ml培養(yǎng)液里約為10~6。 3．與未加巨噬細胞的對照組(受精率為91.0％)和實驗組2(受精率為93.7％)比較，受精時即與巨噬細胞共培養(yǎng)的實驗組1受精率為72.0％，明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.001)。在受精后與巨噬細胞共培養(yǎng)的實驗組2受精卵的囊胚形成率為78.2％明顯高于對照組的受精卵的囊胚形成率60.3％，差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.001)。 4．受精后與巨噬細胞共培養(yǎng)的實驗組2的卵子囊胚形成率73.2％高于對照組的卵子囊胚形成率54.8％，差異具有顯著的統(tǒng)計學意義；高于實驗組1的卵子囊胚形成率50.0％，具有顯著的統(tǒng)計學差異。 5．任何一個時間點觀察都發(fā)現加巨噬細胞的實驗組較對照組里的細胞分裂要快，提前約7～8小時，細胞分裂質量好，碎片少，囊胚形成的時間提前。 結論 1．昆明小鼠的體外受精模型以10周～14周，32克～40克昆明小鼠為最佳，所用促排卵藥物以HMG10IU和HCG10IU為最佳，取出的卵子數量最多質量最好。 2．受精階段與巨噬細胞共培養(yǎng)，可降低小鼠卵子的受精率。 3．與巨噬細胞共培養(yǎng)對受精卵的卵裂、胚胎的生長發(fā)育和囊胚形成有明顯的促進作用。 4．在8細胞形成前后開始添加巨噬細胞共培養(yǎng)，能最大程度增加囊胚形成率。
[Abstract]:Effects of peritoneal macrophages on the fertilization rate and blastocyst formation rate of mouse eggs
In recent years, endometriosis (endometriosis, EM) the rising incidence of about 5% to 15% of women of childbearing age affected, its relationship with infertility has become a research hotspot, but its etiology and pathogenesis has not been fully elucidated, peritoneal fluid secretion in patients with EM increased, the number of macrophages in the peritoneal fluid. And enhance the function of cytokines in peritoneal fluid and serum Zhongshan macrophages also increased significantly, and the lesion is proportional to the degree. These are associated with infertility, how the relationship, is currently unclear. Research at home and abroad on the effect of macrophages on blastocyst formation views are not consistent. The purpose of this study was to establish in vitro fertilization of mouse model to observe the rate of macrophage, influence on the formation of the fertilization rate of eggs and mouse blastocysts.
research objective
1. Establishment of a model of in vitro fertilization in mice
Two. The effect of macrophage on the rate of fertilization and the rate of blastocyst formation in mice
1., the mouse peritoneal macrophages were cultured and identified.
2. sperm extraction from Kunming mice;
3. the drug induced ovulation in Kunming mice.
4. the eggs of Kunming mice were taken.
5. mouse eggs and macrophages were co cultured in vitro, and the effects on the fertilization rate and the blastocyst formation rate of mouse eggs were observed.
research method
1. mice of different ages (less than 8 weeks, 8 weeks to 10 weeks, 14 weeks and 10 to > 14 weeks), different weight (32 grams, 32 grams to 40 grams and 40 grams)), and ovulation induction with different doses (5IU, 10IU and 15IU) and different state (frozen or fresh), then the quantity and quality of egg, determine the ovulation inducing mouse model and the optimal dose of drugs to establish Kunming mice in vitro.
2., intraperitoneal injection of ice saline into mice was used to induce peritoneal macrophages production. After isolation and purification, 95% of the harvested cells were identified as macrophages.
3. through the establishment of experimental group and control group randomly after oocyte eggs into three groups: the control group, the mouse eggs cultured alone, and not in the training process of macrophage co culture; the experimental group: 1 oocytes after co cultured with macrophages, macrophage was observed as system on formation process of fertilization rate the egg and mouse blastocysts were cultured; the experimental group: 2 in 50 hours to 55 hours after fertilization, namely before and after the formation of macrophage in 8 cells were co cultured macrophages were cultured as the rate of observation system influence on the formation of mouse embryo blastocysts were cultured.
Research results
1. the standard in vitro fertilization model established by Kunming mice was 10~14 weeks and the body weight was 32 grams to 40 grams. The best ovulation agents were HMG10IU and HCG10IU. The number of eggs was the largest and the quality was the best.
2., peritoneal macrophages were stained by macrophages. About 95% of the harvested cells were macrophages, and the number of cells harvested from abdominal cavity in one mouse was 10~6. in the 1 culture medium of 3653 1ml.
The control group 3. with macrophages (the fertilization rate was 91% (2) and the experimental group fertilization rate was 93.7%), fertilization with macrophages co cultured in experimental group 1 fertilization rate of 72%, significantly decreased, the difference was statistically significant (P < 0.001). Co cultured with macrophages after fertilization in the experiment group 2 fertilized blastocyst formation rate was 78.2% higher than the control group obviously fertilized blastocyst formation rate was 60.3%, the difference was statistically significant (P < 0.001).
4. after fertilization, the percentage of blastocyst formation in 2 of the experimental group co cultured with macrophages was 73.2% higher than that of the control group. The difference in egg blastocyst formation rate was 54.8%. The difference was statistically significant. The ovum blastocyst formation rate was 1 higher than that in the experimental group 50%, with significant statistical difference.
5. at any time point, we found that the macrophages in the experimental group were faster than those in the control group, and about 7~8 hours earlier. The cell division quality was good, the fragments were few, and the time of blastocyst formation was ahead.
conclusion
1. the Kunming mouse's in vitro fertilization model is 10 weeks to 14 weeks, 32 grams to 40 grams of Kunming mice is the best, the best ovulation drugs are HMG10IU and HCG10IU, and the number of eggs taken is the best.
The 2. fertilization stage and macrophage co culture can reduce the fertilization rate of mouse eggs.
3. with macrophage co culture, the cleavage of the fertilized egg, the growth and development of the embryo and the formation of blastocyst were obviously promoted.
4. the macrophage co culture was added before and after the formation of 8 cells, and the rate of blastocyst formation could be increased to the maximum.

【學位授予單位】：中國協(xié)和醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2006
【分類號】：R711.71;R711.6;R321

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