本文關(guān)鍵詞：人臍血單個(gè)核細(xì)胞體外誘導(dǎo)分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞研究　出處：《山東大學(xué)》2006年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的：研究臍血間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)的分離、體外培養(yǎng)、擴(kuò)增以及堿性成纖維生長(zhǎng)因子(bFGF)對(duì)臍血MSCs體外培養(yǎng)及誘導(dǎo)分化的影響，探討臍血間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)元樣細(xì)胞分化的條件，為臍血MSCs臨床應(yīng)用治療脊髓損傷提供技術(shù)儲(chǔ)備和理論依據(jù)。 方法：用密度梯度離心法將臍血中單個(gè)核細(xì)胞(MNCs)從臍血中分離出來(lái)置于含20％胎牛血清(FBS)的H-DMEM培養(yǎng)液中，在37℃、5％CO2及飽和濕度培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)，72h后試驗(yàn)組加入bFGF，終濃度為10ng／ml，繼續(xù)培養(yǎng)并傳代，在倒置顯微鏡下追蹤觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和bFGF對(duì)臍血細(xì)胞誘導(dǎo)分化的影響；分別取體外培養(yǎng)后3d、7d后和13d的臍血MSCs，進(jìn)行免疫組化法檢測(cè)細(xì)胞表面標(biāo)志物Nestin、MAP2和GFAP。光鏡下隨機(jī)取10個(gè)非重疊視野(×100)，計(jì)算nestin、MAP2和GFAP陽(yáng)性細(xì)胞占總細(xì)胞數(shù)的比例，結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)％表示。陰性對(duì)照用0.01mol／L的PBS代替nestin、MAP2和GFAP單抗。取擴(kuò)增一代的臍血MSCs，用含20g／L牛血清白蛋白(BSA)的PBS洗滌后制成濃度為1.0×10~6／ml的單細(xì)胞懸液，，流式細(xì)胞儀檢測(cè)臍血MSCs表面標(biāo)志物。 結(jié)果：接種24h后懸浮細(xì)胞開始逐漸貼壁，培養(yǎng)后第3d，細(xì)胞形態(tài)呈圓形，卵圓形，紡錘或者逗號(hào)樣(圖a1)，nestin陽(yáng)性細(xì)胞細(xì)胞可見(圖b1)，占4.3±0.8％，MAP2和GFAP染色陰性。然后細(xì)胞數(shù)目逐漸增多，有突起逐漸伸出；培養(yǎng)7d后出現(xiàn)大量的貼壁細(xì)胞，以間充質(zhì)細(xì)胞為主，同時(shí)有大量的破骨樣細(xì)胞混雜，破骨樣細(xì)胞胞體較大，多個(gè)核，圓形，此時(shí)貼壁MSCs細(xì)胞形態(tài)呈長(zhǎng)梭形，單個(gè)核，有較長(zhǎng)的突起，折光性強(qiáng)(圖a2)，nestin、MAP2和GFAP陽(yáng)性細(xì)胞陽(yáng)性率分別為6.8％±0.6％、2.4％±0.6％和2.6％±0.8％；bFGF組與對(duì)照組相比，則細(xì)
[Abstract]:Objective : To study the effect of separation , culture , amplification and basic fibroblast growth factor ( bFGF ) on the proliferation and induction of cord blood MSCs in vitro . Methods : The mononuclear cells in cord blood were isolated from cord blood by density gradient centrifugation and cultured in H - DMEM culture medium containing 20 % fetal bovine serum ( FBS ) . After 72 h , the cells were cultured and passaged . Then , the cells were cultured and passaged at 37 鈩

本文編號(hào)：1357015