發(fā)布時(shí)間：2017-12-28 14:06

  本文關(guān)鍵詞：SARS-CoV N蛋白和蛇毒去整合素Agkistin-s的表達(dá)及功能研究　出處：《浙江大學(xué)》2005年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：第一部分,SARS—Cov N基因的表達(dá)及功能研究。SARS-CoY是一種具包膜的 單股正鏈RNA病毒,它是冠狀病毒家族中新出現(xiàn)的一個(gè)種。SARS—Cov核衣殼體 蛋白N是SARS-Cov的重要的結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)之一,是在患者血清中抗體含量最多的 蛋白。為了進(jìn)一步研究N蛋白的功能,我們分別利用原核和真核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)了 重組的N蛋白,并通過(guò)Ni2\~+柱進(jìn)行了純化。用純化的蛋白免疫新西蘭大白兔,得 到了效價(jià)高、特異性好的多克隆抗血清。 以前研究發(fā)現(xiàn)PRRSV、IBV、MHV和TGEV等冠狀病毒的N蛋白都定位在細(xì)胞 質(zhì)與核仁中,這可能是冠狀病毒的共有特征。序列分析發(fā)現(xiàn)SARS-Cov N蛋白基 因中也有一核定位信號(hào)序列(KKDKKK,370-376aa)。我們利用制備的多克隆抗 血清,通過(guò)桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)和真核表達(dá)系統(tǒng)分別在Tn-581-4和Hela細(xì)胞中對(duì) N進(jìn)行了亞細(xì)胞定位。通過(guò)共聚焦熒光顯微鏡在細(xì)胞質(zhì)與核仁中都觀察到了表達(dá) 的N重組蛋白,因此,SARS-CoY核衣殼體蛋白的亞細(xì)胞定位于細(xì)胞質(zhì)與核仁中, 這一現(xiàn)象可能與N蛋白的生物功能有密切聯(lián)系。 SARS-CoV病毒主要感染肺部組織,通過(guò)誘導(dǎo)肺組織細(xì)胞凋亡而引起損傷, 細(xì)胞凋亡可能在SARS發(fā)病中起重要的作用。進(jìn)一步了解SARS-Cov病毒感染與細(xì) 胞凋亡過(guò)程所可能涉及的病毒基因?qū)?duì)了解SARS-CoW的致病機(jī)制有重要的意 義。定位于細(xì)胞核仁的內(nèi)源蛋白多參與細(xì)胞途徑的調(diào)節(jié),很多病毒通過(guò)其病毒基 因編碼蛋白誘導(dǎo)或者抑制寄主細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)途徑來(lái)參與細(xì)胞調(diào)節(jié)。我們利用Hela 細(xì)胞,進(jìn)一步研究N蛋白在誘導(dǎo)細(xì)胞調(diào)亡方面的作用,結(jié)果發(fā)現(xiàn)重組的N蛋白能 夠通過(guò)capsase途徑誘導(dǎo)Hela細(xì)胞的調(diào)亡。 第二部分,蛇毒去整合素結(jié)構(gòu)域agkistin-s的表達(dá)及功能研究。去整合素 (disintegrin)是從蛇毒中分離出含有Arg-G1y-Asp(RGD)或Lys-Gly-Asp(KGD) 結(jié)構(gòu)域的富含半胱氨酸的一群低分子量多肽。去整合素能夠通過(guò)其RGD三肽拮抗 血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的整合素與細(xì)胞外基質(zhì)黏附,并誘發(fā)其凋亡,從而抑制血管新 生血管的生長(zhǎng)。腫瘤血管生成是腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的基礎(chǔ),抗血管的生成能夠有效
[Abstract]:The first part is the study of the expression and function of SARS - Cov N gene. SARS-CoY is a coated one
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號(hào)】：R373

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1346282