本文關(guān)鍵詞：禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒p30-gp90串聯(lián)表達(dá)蛋白及其免疫原性　出處：《微生物學(xué)報(bào)》2014年03期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：【目的】研究禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒(Reticuloendotheliosis Virus,REV)群特異性抗原P30與囊膜糖蛋白gp90體外共表達(dá)蛋白的免疫原性,為研發(fā)新型REV抗體診斷試劑盒提供基礎(chǔ)�！痉椒ā扛鶕�(jù)REV脾臟壞死病毒(spleen necrosis virus,SNV)株的前病毒基因組cDNA序列,設(shè)計(jì)合成2對(duì)引物,以pPB101質(zhì)粒為模板,分別擴(kuò)增REV p30基因和gp90基因片段。將PCR產(chǎn)物依次克隆入表達(dá)載體pET-28a(+)中,通過(guò)酶切鑒定和測(cè)序分析,篩選陽(yáng)性重組克隆pET-p30-gp90。重組菌經(jīng)異丙基硫代D-半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)后,通過(guò)SDS-PAGE電泳分析表達(dá)情況,Western blot檢測(cè)表達(dá)蛋白與特異性血清之間的反應(yīng)性。制備表達(dá)蛋白的抗血清,以該抗血清與REV感染的雞胚成纖維細(xì)胞(CEF)進(jìn)行間接免疫熒光實(shí)驗(yàn)(IFA),驗(yàn)證表達(dá)蛋白的免疫原性�！窘Y(jié)果】經(jīng)SDS-PAGE電泳后能觀察到預(yù)期大小的表達(dá)條帶,Western blot結(jié)果顯示,重組蛋白能與REV抗血清反應(yīng)。將表達(dá)產(chǎn)物純化后免疫Balb/c小鼠,制備p30-gp90抗血清,該抗血清與REV感染CEF在IFA中呈現(xiàn)特異性熒光反應(yīng)�！窘Y(jié)論】體外串聯(lián)表達(dá)REV p30-gp90蛋白,表達(dá)蛋白具有良好的免疫原性。
[Abstract]:[Objective] to study the Avian Reticuloendotheliosis Virus (Reticuloendotheliosis, Virus, REV) immunogenic protein co expression of group specific antigen P30 and glycoprotein gp90 in vitro, provide the basis for the development of new diagnostic kit for REV antibody. [Methods] 2 pairs of primers were designed and synthesized according to the cDNA sequence of REV spleen necrosis virus (SNV) strain. PPB101 REV was used as template to amplify REV P30 gene and gp90 gene fragment respectively. The PCR products were cloned into the expression vector pET-28a (+) in turn, and the positive recombinant clone pET-p30-gp90 was screened by enzyme digestion and sequencing. The recombinant bacteria were induced by isopropyl thiosulfate D- galactoside (IPTG). The expression was analyzed by SDS-PAGE electrophoresis, and Western blot was used to detect the reactivity between the expressed protein and the specific serum. The antiserum of the expressed protein was prepared, and the immunogenicity of the expressed protein was verified by indirect immunofluorescence assay (IFA) with REV infected chicken embryo fibroblast (CEF). [results] the expected size of the bands could be observed after SDS-PAGE electrophoresis, and the results of Western blot showed that the recombinant protein could react with the antiserum of REV. The expression products were purified and immunized with Balb/c mice to prepare p30-gp90 antiserum. The antiserum and REV infected CEF showed a specific fluorescence reaction in IFA. [Conclusion] REV p30-gp90 protein is expressed in series in series, and the expression protein has good immunogenicity.
【作者單位】： 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院;廣東大華農(nóng)動(dòng)物保健品股份有限公司;中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究所;
【基金】：重大動(dòng)物疫病新型疫苗的關(guān)鍵技術(shù)研究與產(chǎn)業(yè)化(2011A090200117)~~
【分類號(hào)】：R373
【正文快照】： 禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥(Reticuloendotheliosis,RE)是由逆轉(zhuǎn)錄病毒科的禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒(REV)引起的雞、鴨、火雞和其他禽類的一種以淋巴-網(wǎng)狀細(xì)胞增生為特征的腫瘤性病理綜合征[1-2]。REV已經(jīng)呈世界性分布,該病在澳大利亞、匈牙利、英國(guó)、德國(guó)等國(guó)均有報(bào)道,我國(guó)于1988

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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4 張理航;劉茂軍;呂芳;李賀俠;吳敘蘇;馮志新;邵國(guó)青;;剛地弓形蟲(chóng)NT株P(guān)30基因的克隆與表達(dá)[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物傳染病學(xué)分會(huì)第三屆豬病防控學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2008年

5 魏慶寬;李桂萍;李瑾;崔勇;柏雪蓮;王用斌;黃炳成;韓廣東;劉克義;;抗弓形蟲(chóng)P30表面抗原mAb的制備及其對(duì)蟲(chóng)體形態(tài)的影響[A];山東預(yù)防醫(yī)學(xué)會(huì)第二屆學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2006年

6 王雪峰;王帥;林躍智;姜成剛;呂曉玲;趙利平;王鳳龍;周建華;;馬傳染性貧血弱毒疫苗株致弱過(guò)程中不同代次毒株的膜表面蛋白gp90進(jìn)化分析[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)畜牧獸醫(yī)生物技術(shù)學(xué)分會(huì)暨中國(guó)免疫學(xué)會(huì)獸醫(yī)免疫分會(huì)第八次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2010年

7 張理航;邵國(guó)青;劉茂軍;呂芳;李賀俠;吳敘蘇;馮志新;;剛地弓形蟲(chóng)NT株P(guān)30基因的克隆與表達(dá)[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜寄生蟲(chóng)學(xué)分會(huì)第六次代表大會(huì)暨第十次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2009年

8 張文娟;裴宗飛;牛鐘相;;REV囊膜糖蛋白的表達(dá)、純化及單克隆抗體的制備[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)2008年學(xué)術(shù)年會(huì)暨第六屆全國(guó)畜牧獸醫(yī)青年科技工作者學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2008年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 鄧小蕓;網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒LAMP檢測(cè)方法及感染性分子克隆的建立[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 吉榮;禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒分子生物學(xué)特性的研究[D];揚(yáng)州大學(xué);2002年

2 儲(chǔ)德文;非洲豬瘟病毒p30重組蛋白的表達(dá)及單克隆抗體制備[D];揚(yáng)州大學(xué);2013年

3 牛星;禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒env基因蛋白抗原的表達(dá)及其檢測(cè)應(yīng)用[D];廣西大學(xué);2008年

4 張安勇;弓形蟲(chóng)P30重組蛋白的表達(dá)、純化與復(fù)性[D];青島大學(xué);2007年

5 高明超;雞痘病毒基因組中反轉(zhuǎn)錄病毒序列整合的研究及重組雞痘病毒的構(gòu)建[D];揚(yáng)州大學(xué);2007年

6 楊波;不同宿主感染REV情況調(diào)查及分離株gp90基因序列分析[D];東北林業(yè)大學(xué);2013年

7 余沖;禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生病病毒囊膜基因gp90的克隆表達(dá)及間接ELISA方法的初步建立[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

8 張奇舒;密碼子優(yōu)化技術(shù)在肺炎支原體檢測(cè)試劑研發(fā)中的初步應(yīng)用[D];福建農(nóng)林大學(xué);2012年

9 王漢雷;用核酸探針和分子斑點(diǎn)雜交技術(shù)檢測(cè)家禽病毒的核酸[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年

10 鐘登科;鼠抗禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病病毒gp90多抗的研制及gp90在昆蟲(chóng)細(xì)胞中的表達(dá)[D];揚(yáng)州大學(xué);2006年

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本文編號(hào)：1345766