本文關(guān)鍵詞：弓形蟲棒狀體蛋白2多克隆抗體制備純化及其在免疫熒光定位中的運用

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【摘要】：目的制備弓形蟲棒狀體蛋白2(ROP2)多克隆抗體并純化。方法將已構(gòu)建的重組質(zhì)粒pET32aROP2轉(zhuǎn)化入大腸埃希菌(E.coli)BL21(DE3)中,用0.5 mmol/L異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導表達重組蛋白ROP2,分離上清和包涵體,包涵體洗滌后,用尿素溶解;取純化蛋白與等體積福氏完全佐劑或不完全佐劑混合,背部皮下免疫新西蘭大白兔3次,200μg/次,3次免疫之間分別間隔14 d和19 d,末次免疫10 d后收集兔血清,親和純化柱純化,并用間接ELISA檢測抗體效價,蛋白質(zhì)印跡(Western blotting)分析抗體特異性。將弓形蟲速殖子感染人包皮成纖維細胞(HFF細胞),利用制備所得的多克隆抗體采用免疫熒光法檢測ROP2在感染細胞中的定位。結(jié)果通過誘導表達,獲得重組蛋白ROP2,制備的兔源性ROP2抗體純化后為單一蛋白抗體。間接ELISA結(jié)果顯示,抗體滴度為1∶102 400;Western blotting結(jié)果顯示,抗體特異性良好。同時,免疫熒光定位試驗結(jié)果顯示,ROP2定位在弓形蟲的納蟲泡膜上。結(jié)論本研究制備并純化了抗弓形蟲ROP2的兔源性多克隆抗體,并成功應用于ROP2在弓形蟲納蟲泡膜上的免疫熒光定位試驗。
【作者單位】： 南方醫(yī)科大學公共衛(wèi)生與熱帶醫(yī)學院病原生物學系;
【基金】：國家自然科學基金(No.81071377,81271866) 國家教育部博士點基金(No.20104433120014) 廣東省人才引進專項資金(No.2011-26)~~
【分類號】：R392.1
【正文快照】： 剛地弓形蟲(Toxoplasma gondii)是一種細胞內(nèi)專性寄生原蟲,可引起人獸共患弓形蟲病[1]。人誤食被弓形蟲卵囊污染的食物和水,或含弓形蟲包囊的動物肉類而感染[2]。弓形蟲入侵宿主細胞后以納蟲泡的形式在宿主細胞內(nèi)生長和繁殖,而納蟲泡膜主要為宿主細胞膜,以及弓形蟲分泌細胞器

【參考文獻】

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本文編號：1236401