本文關(guān)鍵詞：血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子全長(zhǎng)抗體在畢赤酵母中的表達(dá)與活性鑒定

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【摘要】：目的:構(gòu)建血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)全長(zhǎng)抗體表達(dá)載體pPICZαA-VH-CH-VL-CL,評(píng)價(jià)其在畢赤酵母中的表達(dá)產(chǎn)物與抗原的結(jié)合特性,及其抑制細(xì)胞增殖的活性。方法:利用基因合成分別獲得VEGF抗體CL和CH序列,分別構(gòu)建pPICZαA-CH和pPICZαA-CL重組質(zhì)粒,再利用同尾酶特性構(gòu)建雙啟動(dòng)子表達(dá)盒的重組pPICZαA-CH-CL載體,用Westen印跡對(duì)其進(jìn)行表達(dá)鑒定后將VH和VL序列插入該載體,獲得VEGF的全長(zhǎng)抗體表達(dá)載體pPICZαA-VH-CH-VL-CL;通過(guò)膜篩和ELISA進(jìn)行菌株篩選,并對(duì)VEGF抗體表達(dá)陽(yáng)性菌株進(jìn)行小量表達(dá)和純化,采用CCK-8法對(duì)其抑制人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)增殖的活性進(jìn)行初步評(píng)價(jià)。結(jié)果:獲得表達(dá)輕、重鏈的VEGF抗體表達(dá)載體,ELISA實(shí)驗(yàn)證明pPICZαA-VH-CH-VL-CL具有一定的VEGF抗原結(jié)合特性;體外增殖實(shí)驗(yàn)表明,該抗體可以以劑量依賴性抑制HUVEC增殖。結(jié)論:在畢赤酵母中表達(dá)、純化了具有一定功能活性的VEGF全長(zhǎng)抗體,為后續(xù)比較研究酵母糖基化改造對(duì)VEGF抗體的藥效學(xué)和藥代學(xué)的影響提供了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 解放軍醫(yī)學(xué)院病理科;軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射與輻射醫(yī)學(xué)研究所藥理毒理研究室;安徽醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)院;解放軍第309醫(yī)院;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81272701/H1617) 北京市自然科學(xué)基金(5113034)
【分類號(hào)】：Q78;R392.1
【正文快照】： 生物技術(shù)蛋白類藥物(如抗體、疫苗、細(xì)胞因子、酶等)多數(shù)為糖蛋白。蛋白的糖基化形式分為N-糖基化和O-糖基化兩種,其中N-糖基化尤其重要,因?yàn)榕c蛋白的折疊、體內(nèi)半衰期、穩(wěn)定性及蛋白功能密切相關(guān)[1-2]。迄今,上市的人源化治療抗體中95%均為哺乳動(dòng)物表達(dá)系統(tǒng)的產(chǎn)物。然而,由于

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