本文關(guān)鍵詞：剛地弓形蟲(chóng)自噬相關(guān)蛋白3基因的克隆表達(dá)與多抗制備

  更多相關(guān)文章： 剛地弓形蟲(chóng) 自噬相關(guān)蛋白 克隆 表達(dá) 多克隆抗體

【摘要】：目的克隆、表達(dá)剛地弓形蟲(chóng)(Toxoplasma gondii)自噬相關(guān)蛋白3(Tg Atg3)基因,并制備能特異性識(shí)別該蛋白的多克隆抗體。方法以弓形蟲(chóng)RH株c DNA為模板,構(gòu)建p ET28a-Tg Atg3重組質(zhì)粒,轉(zhuǎn)化入大腸埃希菌(E.coli)Rosetta感受態(tài)細(xì)胞,經(jīng)自誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)表達(dá),用鎳柱親和層析法純化誘導(dǎo)表達(dá)產(chǎn)物,以小鼠抗His標(biāo)簽單克隆抗體作為一抗,蛋白質(zhì)印跡(Western blotting)進(jìn)行鑒定。以純化的Tg Atg3蛋白作為抗原皮下多點(diǎn)注射免疫日本大耳白兔,125μg/(只·次),免疫4次后心臟取血,制備血清,獲得特異性抗Tg Atg3多克隆抗體。對(duì)制備的多克隆抗體進(jìn)行Western blotting與間接免疫熒光法(IFA)鑒定。結(jié)果雙酶切、PCR擴(kuò)增及測(cè)序結(jié)果證實(shí)目的片段序列正確,原核表達(dá)質(zhì)粒p ET28a-Tg Atg3構(gòu)建成功。SDS-PAGE和Western blotting結(jié)果表明,重組E.coli中可見(jiàn)相對(duì)分子質(zhì)量(Mr)約44 000的可溶性Tg Atg3蛋白的高效表達(dá)。抗體檢測(cè)Western blotting結(jié)果顯示,制備的多克隆抗體能特異性識(shí)別弓形蟲(chóng)RH株的Tg Atg3蛋白。IFA結(jié)果顯示,該多克隆抗體可與蟲(chóng)體胞漿內(nèi)Tg Atg3結(jié)合。結(jié)論獲得重組可溶性Tg Atg3蛋白,制備的多克隆抗體能特異性識(shí)別弓形蟲(chóng)RH株的天然Atg3蛋白。
【作者單位】： 東陽(yáng)市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科;溫州醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院;溫州醫(yī)科大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院;溫州醫(yī)科大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)院;
【基金】：浙江省自然科學(xué)基金(No.LY12H19004,LQ14H190003) 浙江省科技廳公益性項(xiàng)目(No.2014C33161) 浙江省新苗人才計(jì)劃(No.2014R413082)~~
【分類(lèi)號(hào)】：R382.5
【正文快照】： (1 Clinical Laboratory,Dongyang People’s Hospital,Jinhua 322100,China;2 School of Basic MedicalSciences,Wenzhou Medical University,Wenzhou 325035,China;3 The First Clinical Medical College,Wenzhou Medical University,Wenzhou 325035,China;4 School of Medi

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 王南寧;譚玉珍;王海杰;;營(yíng)養(yǎng)缺乏對(duì)自由生活阿米巴自噬的影響[J];中國(guó)寄生蟲(chóng)學(xué)與寄生蟲(chóng)病雜志;2010年06期

2 譚峰;華倩倩;李星潘;李相志;梁韶暉;;剛地弓形蟲(chóng)自噬相關(guān)蛋白8(TgAtg8)多克隆抗體制備及初步應(yīng)用[J];中國(guó)寄生蟲(chóng)學(xué)與寄生蟲(chóng)病雜志;2014年02期

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前7條

1 秦興發(fā);張華;漆洪波;陳國(guó)慶;馬海霞;;缺氧誘導(dǎo)滋養(yǎng)細(xì)胞自噬參與子癇前期發(fā)病的實(shí)驗(yàn)研究[J];重慶醫(yī)學(xué);2014年05期

2 田麗娟;魏鳳菊;高翔;趙甜甜;劉剛;侯春燕;王冬梅;;擬南芥AtATG8c基因缺失突變體的鑒定及其對(duì)非生物脅迫的響應(yīng)[J];河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);2014年05期

3 岳愛(ài)梅;劉營(yíng);譚葉;叢慧;林佳慧;張英杰;張忠廣;;自生阿米巴和纖毛蟲(chóng)的分離培養(yǎng)與觀(guān)察[J];熱帶醫(yī)學(xué)雜志;2013年02期

4 陳恒余;孫軍;;自噬的新分支:內(nèi)質(zhì)網(wǎng)自噬[J];華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2013年04期

5 賀強(qiáng);漆正堂;丁樹(shù)哲;;參與自噬的相關(guān)蛋白質(zhì)的翻譯后修飾[J];中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào);2013年09期

6 譚峰;華倩倩;李星潘;李相志;梁韶暉;;剛地弓形蟲(chóng)自噬相關(guān)蛋白8(TgAtg8)多克隆抗體制備及初步應(yīng)用[J];中國(guó)寄生蟲(chóng)學(xué)與寄生蟲(chóng)病雜志;2014年02期

7 Paola Maycotte;Andrew Thorburn;;Targeting autophagy in breast cancer[J];World Journal of Clinical Oncology;2014年03期

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 楊?lèi)?ài)民;Neuronostatin對(duì)痛覺(jué)、胃腸運(yùn)動(dòng)和情緒的影響及脂基化蛋白LC3-Ⅱ的半合成[D];蘭州大學(xué);2013年

2 張偉;NO/cGMP信號(hào)通路在新生和未成熟雌性大鼠卵泡形成和發(fā)育中的生物學(xué)作用及其調(diào)控機(jī)制研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

3 鄒s舠，

本文編號(hào)：1181914