本文關(guān)鍵詞：高致病性2型豬鏈球菌截短型類枯草桿菌絲氨酸蛋白酶基因的鑒定和功能研究

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【摘要】：【目的】克隆表達(dá)高致病性2型豬鏈球菌05ZYH33株的SspA截短型基因,驗(yàn)證其是否具有酶學(xué)活性,并構(gòu)建該基因的缺失突變株細(xì)菌,探討其在2型豬鏈球菌致病過程中所起的作用【。方法】構(gòu)建SS2的SspA截短型基因05SSU0811原核表達(dá)質(zhì)粒,表達(dá)并純化05SSU0811蛋白,運(yùn)用絲氨酸蛋白酶底物Succinyl-Ala-Ala-Pro-Phe-p-nitroanilide(pNa),通過顯色反應(yīng)檢測表達(dá)產(chǎn)物的酶學(xué)活性;運(yùn)用同源重組技術(shù)敲除05SSU0811基因,多重交叉PCR篩選敲除株并測序鑒定,動(dòng)物試驗(yàn)分析05SSU0811基因缺失對(duì)細(xì)菌毒力的影響�！窘Y(jié)果】成功表達(dá)并純化05SSU0811蛋白,濃度約為3.5 g/L。絲氨酸蛋白酶活性測定試驗(yàn)證實(shí)其具有酶學(xué)活性;獲得05SSU0811基因缺失突變株,小鼠攻毒試驗(yàn)表明,野生株攻毒的20只小鼠全部死亡,基因缺失突變株攻毒組死亡9只,死亡率45%,兩組間死亡率有顯著性差異。表明05SSU0811基因缺失的菌株毒力較野生株明顯下降。【結(jié)論】05SSU0811基因編碼的截短型絲氨酸蛋白酶仍然具有酶學(xué)活性,SS2的截短型基因SspA在高致病性2型豬鏈球菌的致病性方面具有一定作用。
【作者單位】： 第三軍醫(yī)大學(xué)基礎(chǔ)部微生物學(xué)教研室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金青年科學(xué)基金項(xiàng)目(No.81301398) 全軍醫(yī)學(xué)科技青年培育項(xiàng)目(No.13QNP106)
【分類號(hào)】：R378;S852.61
【正文快照】： 絲氨酸蛋白酶是一類以絲氨酸為活性中心的蛋白水解酶,主要分為6個(gè)蛋白超家族,其中類胰蛋白酶和類枯草桿菌蛋白酶是其最主要的成員。類枯草桿菌蛋白酶屬于絲氨酸蛋白酶S8家族,廣泛存在于細(xì)菌、真菌和寄生蟲等病原生物中[1-3]。在細(xì)菌中,類枯草桿菌絲氨酸蛋白酶(Surface-associa

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1175362