本文關(guān)鍵詞：anoctamin 1在中國倉鼠卵巢細胞中的表達及其離子通道特性

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【摘要】：目的:探討anoctamin 1在中國倉鼠卵巢細胞(CHO)中的表達情況,分析其離子通道特性,為研究鈣激活氯離子通道的生理功能提供實驗依據(jù)。方法:PCR方法獲得anoctamin 1編碼區(qū)基因,構(gòu)建pcDNA3.1-anoctamin 1真核表達載體。脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染anoctamin 1至CHO中,抗生素篩選獲取穩(wěn)定表達anoctamin 1的CHO株。應(yīng)用RT-PCR技術(shù)和倒置熒光顯微鏡檢測anoctamin 1于CHO中的表達和分布情況。應(yīng)用鹵族元素敏感的黃色熒光蛋白雙突變體YFP-H148Q/I152L檢測anoctamin 1離子通道的功能。以加入calcimycin和高濃度碘離子的PBS緩沖液的為實驗組,未加入calcimycin和高濃度碘離子的PBS緩沖液的為對照組。結(jié)果:限制性內(nèi)切酶酶切后的瓊脂糖凝膠電泳和測序,目的基因anoctamin 1克隆至真核表達載體pcDNA3.1;RT-PCR和倒置熒光顯微鏡觀察,CHO在mRNA和蛋白水平表達anoctamin 1,且anoctamin 1蛋白主要表達于CHO膜上;熒光淬滅動力學(xué)實驗,CHO表達的anoctamin 1具有轉(zhuǎn)運碘離子的作用,且實驗組碘離子轉(zhuǎn)運速度顯著高于對照組(P0.05)。結(jié)論:anoctamin 1可高效表達于CHO膜;CHO表達的anoctamin 1具有經(jīng)典鈣激活氯離子通道特性。
【作者單位】： 吉林醫(yī)藥學(xué)院生物化學(xué)檢驗教研室;吉林醫(yī)藥學(xué)院實驗中心;吉林醫(yī)藥學(xué)院病原教研室;
【基金】：吉林省教育廳科研基金資助課題(2013-351) 吉林省大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計劃資助課題(2013,2014) 吉林醫(yī)藥學(xué)院大學(xué)生科研基金資助課題(吉醫(yī)學(xué)科字[2012]第12號)
【分類號】：R363
【正文快照】： anoctamin 1是最近發(fā)現(xiàn)的在哺乳動物細胞膜上廣泛表達的一類陰離子通道,因其主要激活方式是通過胞漿中游離鈣離子,故也稱之為鈣激活氯離子通道。細胞內(nèi)鈣離子濃度升高時,某些特定的生物活性物質(zhì)與細胞膜上的G蛋白偶聯(lián)受體結(jié)合,通過一系列級聯(lián)反應(yīng)促使內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中鈣離子釋放,進而

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本文編號：1171017