本文關鍵詞：弓形蟲微線體蛋白MIC2和M2AP真核表達載體的構(gòu)建

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【摘要】：目的構(gòu)建弓形蟲RH株微線體蛋白M2AP和MIC2的真核表達載pGAPZαA-mic2和pGAPZαA-m2ap,為建立同時表達MIC2和M2AP蛋白的重組畢赤酵母表達系統(tǒng),制備重組粘附蛋白復合體MIC2-M2AP奠定基礎。方法提取弓形蟲RH株速殖子總RNA,用Oligo dT-Adaptor引物逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA。根據(jù)已知的弓形蟲mic2和m2ap基因序列,采用引物設計軟件Primer premier5.0自行設計并合成引物,以cDNA為模板,PCR擴增mic2和m2ap基因,克隆入pMD-19-simple-T載體,經(jīng)酶切和測序鑒定后回收目的片段,分別插入至pGAPZαA內(nèi),構(gòu)建重組畢赤酵母表達載體pGAPZαA-mic2和pGAPZαA-m2ap,轉(zhuǎn)化入E.coli DH5α。提取轉(zhuǎn)化菌質(zhì)粒,進行酶切和測序鑒定。結(jié)果 PCR擴增得到的mic2和m2ap基因分別為2 200bp和1 000bp,與預期大小一致。T-A克隆重組質(zhì)粒pMD19-T-mic2、pMD19-T-m2ap和重組酵母表達質(zhì)粒pGAPZαA-mic2、pGAPZαA-m2ap經(jīng)測序鑒定,與GenBank收錄的弓形蟲mic2基因和m2ap基因序列同源性為100%,重組畢赤酵母表達載體pGAPZαA-mic2和pGAPZαA-m2ap構(gòu)建成功。結(jié)論成功構(gòu)建弓形蟲重組畢赤酵母表達載體pGAPZαA-mic2和pGAPZαA-m2ap,為進一步研究MIC2和M2AP相互作用機制及其免疫保護效應奠定了基礎。
【作者單位】： 溫州醫(yī)科大學基礎醫(yī)學院寄生蟲學教研室;
【關鍵詞】： 剛地弓形蟲 MIC MAP 真核表達
【基金】：浙江省自然科學基金項目(No.Y2100971) 浙江省大學生科技創(chuàng)新活動計劃項目(No.2013R413013) 溫州醫(yī)科大學本�？茖W生科研課題項目(No.wyx201201026)
【分類號】：R382.5
【正文快照】： 剛地弓形蟲(Toxoplasma gondii)是一種專性細胞內(nèi)寄生蟲,可寄生于包括人類在內(nèi)的哺乳動物、爬行類和鳥類的所有有核細胞中,引起人獸共患弓形蟲病。人感染弓形蟲后多為隱性感染,但免疫缺陷病人及孕婦感染弓形蟲后危害嚴重。目前治療弓形蟲病的藥物療效不理想,而弓形蟲疫苗接種

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本文編號：1116200