本文關(guān)鍵詞：單純皰疹病毒Ⅱ型gC2蛋白在CHO細胞中的表達、純化及其免疫活性

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【摘要】：目的在CHO細胞中表達單純皰疹病毒(herpes simplex virus,HSV)Ⅱ型gC2蛋白,純化后檢測其免疫活性。方法利用ANTHEWIN等軟件分析GenBank中HSVⅡ型gC2的氨基酸序列,篩選抗原表位富集、且親水性較好的蛋白胞外區(qū)片段,選擇真核和原核生物均偏愛的密碼子,通過OptimumGene軟件對基因進行序列優(yōu)化,化學(xué)合成全新的基因序列HSV2-gC2,PCR擴增后,插入pMCE5載體,構(gòu)建重組表達質(zhì)粒pMCE5-gC2,轉(zhuǎn)染至CHO細胞中進行真核表達。表達的重組gC2蛋白經(jīng)親和層析純化后,進行SDS-PAGE及Western blot鑒定。將純化的重組gC2蛋白分別于第0、2、4周經(jīng)腹腔免疫小鼠,以免疫PBS作為對照,采用間接ELISA法檢測免疫小鼠的血清抗體水平;酶聯(lián)免疫斑點試驗(ELISPOT)檢測免疫小鼠脾淋巴細胞分泌IFNγ(代表Th1細胞因子)和IL-4(代表Th2細胞因子)的細胞頻率。結(jié)果重組表達質(zhì)粒pMCE5-gC2經(jīng)菌落PCR、雙酶切(EcoRⅠ/NotⅠ)及測序證實構(gòu)建正確;純化的重組gC2蛋白相對分子質(zhì)量約為90 000,純度約為85%,濃度為40μg/ml,可與小鼠抗His單克隆抗體特異性結(jié)合;通過3次免疫,小鼠產(chǎn)生了高水平的血清抗體,與免疫前相比,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.001);免疫小鼠脾細胞經(jīng)特異性抗原刺激后,分泌IFNγ和IL-4的細胞頻率分別為(13.46±2.832)/106和(19.2±2.48)/106個細胞,均顯著高于對照組(P0.001)。結(jié)論在CHO細胞中表達了重組gC2蛋白,純化的蛋白能夠激發(fā)小鼠產(chǎn)生良好的體液免疫和細胞免疫應(yīng)答,為進一步研制HSV亞單位疫苗奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 南京醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生物化學(xué)與分子生物學(xué)系;南京軍區(qū)軍事醫(yī)學(xué)研究所;中國藥科大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 單純皰疹病毒Ⅱ型 包膜蛋白C 中國倉鼠卵巢細胞 免疫活性
【基金】：國家863重大課題(2012AA02A405) 國家傳染病重大專項(2013zx10004804-003) 國家重大新藥創(chuàng)制課題(2014ZX09304314-003) 國家自然基金(81373109) 江蘇省自然基金課題(BK2012526) 江蘇省社會發(fā)展基金課題(BE2010603)資助
【分類號】：R373.11
【正文快照】： 單純皰疹病毒(herpers simplex virus,HSV)屬于皰疹病毒科α亞科,是人類感染的常見病毒之一。HSV根據(jù)血清型可分為Ⅰ型和Ⅱ型兩種,其中,Ⅰ型主要通過口面部感染,也通過性傳播[1],Ⅱ型主要通過性傳播[2-3],其中HSVⅡ型可通過產(chǎn)道傳染給新生兒,造成新生兒皰疹性腦膜炎[4],致新生

【共引文獻】

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【相似文獻】

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4 任曉霞;張政;蔡桂紅;李玉英;王轉(zhuǎn)花;;TBa過敏原表位區(qū)段的表達及免疫活性分析[A];2009年中國藥學(xué)大會暨第九屆中國藥師周論文集[C];2009年

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本文編號：1115209