本文關鍵詞：sox9和LMP1基因慢病毒載體共轉染兔骨髓間充質干細胞后的表達

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【摘要】：背景:與傳統(tǒng)細胞因子誘導液誘導的方法相比,將基因通過慢病毒轉染入宿主細胞,可以得到長期高效的持續(xù)表達,采取雙/多基因共修飾治療的策略,較采用單一的因子來誘導骨髓間充質干細胞向類髓核細胞方向轉化可獲得更好的效果。目的:構建sox9基因慢病毒載體以及LMP1基因慢病毒載體,并共轉染兔骨髓間充質干細胞,觀察SOX9和LMP1基因的表達情況。方法:雙酶切從Gene Art提供的含sox9基因序列的質粒13ABIV6C_1366933并克隆到p Lenti6.3_MCS_IRES2-EGFP載體,獲得含sox9基因的質粒p LMIG-13GS0345-1。通過單鏈oligo設計及合成LMP1基因序列,并克隆到p Lenti6.3_MCS_IRES2-Ds Red-Monomer載體,獲得含LMP1基因的質粒13GS0318-1。再通過293T細胞包裝后獲得綠色熒光蛋白標記的sox9基因慢病毒載體(Lenti-SOX9-GFP),以及紅色熒光蛋白的LMP1基因慢病毒載體(Lenti-LMP1-RFP)。將Lenti-SOX9-GFP和Lenti-LMP1-RFP共轉染兔骨髓間充質干細胞,觀察sox9基因及LMP1基因的表達情況。結果與結論:測序結果顯示質粒p LMIG-13GS0345-1和13GS0318-1中的插入序列與基因庫中sox9(NM_000346)及LMP1(AF345904.1)基因序列完全一致,成功構建Lenti-SOX9-GFP和Lenti-LMP1-RFP慢病毒載體。Lenti-SOX9-GFP和Lenti-LMP1-RFP共轉染兔骨髓間充質干細胞后同一視野下可觀察到綠色和紅色熒光蛋白的共表達,RT-PCR與Western Blot檢測結果證明Lenti-SOX9-GFP和Lenti-LMP1-RFP可成功高效共轉染目的細胞并可在m RNA及蛋白水平同時表達SOX9及LMP1。結果說明實驗成功構建了綠色熒光蛋白標記的攜帶sox9基因的Lenti-SOX9-GFP慢病毒載體,以及紅色熒光蛋白的攜帶LMP1基因的Lenti-LMP1-RFP慢病毒載體,為sox9和LMP1基因共修飾組織工程髓核的研究提供前期實驗基礎。
【作者單位】： 解放軍第113醫(yī)院骨科;解放軍第二軍醫(yī)大學附屬長海醫(yī)院胸心外科實驗室;
【關鍵詞】： 干細胞 間質干細胞 慢病毒感染 sox轉錄因子 骨髓干細胞 慢病毒 sox基因 LMP基因 椎間盤 髓核細胞 共轉染 組織工程
【基金】：南京軍區(qū)醫(yī)學科技創(chuàng)新重點課題(12Z06),課題名稱:LMP-1和SOX9共修飾BMSCs后復合血小板凝膠生物支架構建組織工程髓核的實驗研究~~
【分類號】：R3416
【正文快照】： 0引言Introduction在體內,髓核組織修復和再生涉及復雜的信號調控網絡及多種細胞因子的共同參與,研究表明sox9和LMP1基因在髓核組織修復和再生過程中具有重要的作用。調節(jié)Ⅱ型膠原合成的性別決定區(qū)Y-Box(sex determining regionY-Box9,sox-9)在髓核退變中越來越受到人們的關注

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1 蘇玲，滕智平，趙全壁，，曾毅;高分化及低分化鼻咽癌細胞株中Epstein－Barr病毒潛伏感染膜蛋白（LMP1）基因的原位雜交與克隆及序列分析[J];病毒學報;1995年02期

2 楊成勇,蔡偉民,沈倍奮,曾毅;鼻咽癌患者EB病毒潛伏膜蛋白(LMP1)的特異性細胞免疫研究[J];病毒學報;1999年03期

3 張志偉;張瓊;余艷輝;歐陽詠梅;賀智敏;;LMP1羧基末端第三活性區(qū)對鼻咽上皮細胞生物學特性的影響[J];南華大學學報(醫(yī)學版);2009年06期

4 湯敏中,鄭裕明,郭秀嬋,張永利,曾毅;鼻咽癌患者EBV LMP1基因C端區(qū)的缺失突變及序列分析[J];中華實驗和臨床病毒學雜志;2003年01期

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中國博士學位論文全文數(shù)據庫 前1條

1 趙莎;結外鼻型NK/T細胞淋巴瘤腫瘤組織和裸鼠移植瘤模型中LMP1的檢測及其致瘤機制的探討[D];四川大學;2005年

本文編號：1110889