本文關(guān)鍵詞：全人源scFv-Fc真核表達(dá)載體的構(gòu)建與鑒定

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【摘要】：目的:構(gòu)建全人源抗IL-33 scFv-Fc重組載體,轉(zhuǎn)染中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞(Chinese hamster ovary cells,CHO),表達(dá)并鑒定融合抗體蛋白。方法:RT-PCR擴(kuò)增人IgG1 Fc段并插入真核表達(dá)載體pcDNA3.1中,構(gòu)建pcDNA3.1/Fc重組載體;將合成的信號(hào)肽(SP)序列插入重組質(zhì)粒pcDNA3.1/Fc,構(gòu)建重組pcDNA3.1/SP-Fc通用載體;最后將本實(shí)驗(yàn)室前期篩選的抗IL-33 scFv插入重組質(zhì)粒pcDNA3.1/SP-Fc中,構(gòu)建重組pcDNA3.1/SP-scFv-Fc載體,測(cè)序正確后轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞。RT-PCR、Western blot檢測(cè)目的基因的轉(zhuǎn)錄及表達(dá)。結(jié)果:重組質(zhì)粒測(cè)序結(jié)果表明成功地構(gòu)建了pcDNA3.1/SP-scFv-Fc重組真核表達(dá)載體,插入的SP-scFv-Fc目的基因大小為1 560 bp左右。轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞后,RT-PCR結(jié)果顯示目的基因在CHO細(xì)胞中成功轉(zhuǎn)錄,Western blot顯示表達(dá)的蛋白可以和羊抗人IgG1 Fc抗血清發(fā)生特異性免疫反應(yīng)。結(jié)論:成功構(gòu)建了pcDNA3.1/SP-scFv-Fc重組真核表達(dá)載體,以便于后續(xù)在CHO細(xì)胞中表達(dá)。
【作者單位】： 瀘州醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： scFv-Fc CHO細(xì)胞 真核表達(dá) IL-
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(31000415) 四川省青年基金(2012JQ0018) 瀘州市科技局項(xiàng)目(13ZB0262)
【分類(lèi)號(hào)】：R392.11
【正文快照】： IL-33是IL-1家族的新成員,廣泛表達(dá)于多種組織,高表達(dá)于胃、肺、脊髓、腦和皮膚,參與宿主防御、免疫調(diào)節(jié)與炎癥反應(yīng)[1]。IL-33可誘導(dǎo)表達(dá)IL-4、IL-5以及IL-13從而在黏膜組織中引起嚴(yán)重的病理改變。本實(shí)驗(yàn)室前期通過(guò)噬菌體展示技術(shù)篩選了全人源抗IL-33的單鏈抗體(single-chain

【參考文獻(xiàn)】

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1 王e，

本文編號(hào)：1094682