本文關(guān)鍵詞：人源性抗前列腺特異性膜抗原單鏈抗體的基因構(gòu)建、表達及鑒定

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【摘要】：目的:分別構(gòu)建人源性抗前列腺特異性膜抗原(PSMA)單鏈抗體(sc Fv)/魚精蛋白截短體(tp)、sc Fv/弗林蛋白酶識別位點(Fdt)/流感病毒融合肽結(jié)構(gòu)域(HA2)/tp融合蛋白基因。利用原核表達體系表達、純化并檢測sc Fv、sc Fv-tp、sc Fv-Fdt-HA2-tp融合蛋白的活性。方法:采用PCR的方法,擴增融合基因sc Fv、sc Fv-tp、sc Fv-Fdt-HA2-tp,將獲得的基因克隆入原核表達載體p ET28,在大腸桿菌BL21中表達,表達產(chǎn)物經(jīng)SDS-PAGE和Western印跡鑒定,通過Ni2+-NTA螯合層析純化。ELISA分析融合蛋白抗原親和活性。結(jié)果:成功構(gòu)建了人源性抗PSMA融合基因,經(jīng)IPTG誘導后在M15中以包涵體形式表達。表達的目的蛋白均能與PSMA抗原結(jié)合。結(jié)論:融合蛋白具有結(jié)合抗原的活性,為靶向遞送siRNA的研究奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 解放軍323醫(yī)院泌尿外科;第四軍醫(yī)大學唐都醫(yī)院泌尿外科;西安交通大學第二附屬醫(yī)院藥劑科;第四軍醫(yī)大學西京醫(yī)院泌尿外科;第四軍醫(yī)大學免疫教研室;
【關(guān)鍵詞】： 前列腺特異性膜抗原 單鏈抗體 融合蛋白 靶向輸送
【基金】：國家自然科學基金(30973000)~~
【分類號】：R392.1
【正文快照】： Supported by a grant from National Natural Science Foundation of China(30973000).Correspondence to:SU Yan-sheng,email:suys2006@163.comReceived:March 12,2014;accepted:August 26,2014單鏈抗體(single-chain variable fragment,sc Fv)是將免疫球蛋白的重鏈可變區(qū)(V

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本文編號：1092663