發(fā)布時間：2017-10-25 00:35

  本文關(guān)鍵詞：CD48表達可作為區(qū)分造血干細胞分裂方式的活性標志

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【摘要】：造血干細胞在細胞分裂時具有維持自我更新和產(chǎn)生定向分化的能力,其依賴于三種細胞分裂方式,一個干細胞產(chǎn)生兩個新的干細胞(對稱的更新分裂)、兩個分化細胞(對稱的分化分裂)或者一個干細胞和一個分化細胞(不對稱分裂)。本研究旨在探索一種高效、穩(wěn)定的區(qū)分造血干細胞分裂方式的方法。前期研究表明,Numb蛋白的分布情況可以作為許多細胞辨別分裂方式的標志,本研究利用免疫熒光技術(shù)檢測Numb蛋白在小鼠分裂期CD48-CD150+LSK細胞中的分布情況,探索Numb蛋白與中心體的關(guān)系。由于CD48表達陽性標志著細胞失去了骨髓重建能力,因此本研究把CD48的表達作為區(qū)分造血干細胞自我更新或定向分化的一個活性標志。從小鼠全骨髓細胞中分選出CD48-CD150+LSK細胞,培養(yǎng)體系中加入自行制備的AF 488-conjugated anti-CD48抗體,培養(yǎng)3 d后共聚焦熒光顯微鏡觀察及流式細胞分析是否存在AF488+細胞及其所占比例,然后二次分選AF488+和AF488-細胞進行細胞集落形成實驗(colony forming cell assay,CFC)與細胞增殖能力比較。結(jié)果表明:Numb蛋白在處于分裂期的CD48-CD150+LSK細胞中對稱或不對稱分布在細胞分裂平面兩側(cè),這提示Numb蛋白染色可以作為一種區(qū)分造血干細胞分裂方式的方法。此外,CD48-CD150+LSK細胞在含有自行制備的AF488-conjugated anti-CD48抗體的培養(yǎng)體系中培養(yǎng)3 d后產(chǎn)生約40%AF488+細胞,共聚焦熒光顯微鏡統(tǒng)計的陽性細胞比例與流式細胞分析檢測結(jié)果一致。二次分選AF488+和AF488-細胞,AF488+細胞群的集落形成能力顯著高于AF488-細胞群(P0.05),AF488-細胞群的增殖能力顯著高于AF488+細胞群(P0.05)。結(jié)論:CD48表達作為細胞干性丟失的活性標志,可區(qū)分造血干細胞的分裂方式。該方法與Numb蛋白染色方法相比,具有用于活細胞的優(yōu)勢,它為后續(xù)的細胞培養(yǎng)與細胞移植等研究工作提供了更大的便利。
【作者單位】： 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院、北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院血液病醫(yī)院血液學(xué)研究所、實驗血液學(xué)國家重點實驗室;
【關(guān)鍵詞】： 造血干細胞 CD 細胞分裂
【基金】：科技部支撐項目(2013BAI01B09) 科技部重大科學(xué)計劃(2013CB966902,2011CB964801,2012CB966604) 國家自然科學(xué)基金(81170465,81070390,81330015,81130074)
【分類號】：R329.28
【正文快照】： 造血干細胞(hematopoietic stem cells,HSC)在生物體的整個生命周期中既能維持造血干細胞池的相對穩(wěn)定,又能增殖分化成造血系統(tǒng)各系細胞。但是,HSC是怎樣同時調(diào)控自我更新和細胞分化的,迄今為止對此問題仍不是很清楚。近幾年研究者們發(fā)現(xiàn),干細胞維持自我更新和定向分化的平衡

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本文編號：1091311