本文關(guān)鍵詞：一種小鼠睪丸細(xì)胞涂片的快速制備方法

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【摘要】：目的建立一種用于免疫熒光實(shí)驗(yàn)的小鼠睪丸細(xì)胞涂片的快速制備新方法。方法分別給出生后16、21、28 d和120 d的小鼠腹腔注射秋水仙素,3 h后取睪丸組織剔除白膜,分離曲精小管進(jìn)行剪碎,加入冷PBS重懸細(xì)胞,過(guò)濾,并用冷PBS洗滌細(xì)胞3次,然后低滲處理,最后經(jīng)多聚甲醛固定后鋪片。對(duì)細(xì)胞核進(jìn)行DAPI染色,并以21 d小鼠睪丸涂片為例進(jìn)行免疫熒光實(shí)驗(yàn),檢測(cè)所制備的細(xì)胞涂片的質(zhì)量。結(jié)果所制備的小鼠睪丸細(xì)胞涂片經(jīng)DAPI染色,每張細(xì)胞涂片均分布大量生殖細(xì)胞,背景清晰,根據(jù)細(xì)胞核的大小與著色,可初步判斷生殖細(xì)胞類型;用不同發(fā)育階段小鼠所制備的睪丸細(xì)胞涂片,細(xì)胞分布類型有很大差異,其中28 d小鼠制備的睪丸細(xì)胞涂片中生殖細(xì)胞類型最多;以21 d小鼠睪丸細(xì)胞涂片為例進(jìn)行免疫熒光實(shí)驗(yàn),紅色和綠色熒光標(biāo)記的目標(biāo)蛋白在精母細(xì)胞中表達(dá)清晰,背景干凈,說(shuō)明所制備的細(xì)胞涂片適合于免疫熒光檢測(cè)。結(jié)論成功建立了一種快速制備小鼠睪丸細(xì)胞涂片的新方法。
【作者單位】： 中南大學(xué)湘雅三醫(yī)院藥學(xué)部;中南大學(xué)藥學(xué)院;中南大學(xué)湘雅三醫(yī)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中心;
【關(guān)鍵詞】： 小鼠睪丸 細(xì)胞涂片 低滲處理 免疫熒光技術(shù) 精子發(fā)生
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81170615) 湖南省科技廳項(xiàng)目(S2010R1040)
【分類號(hào)】：R361.2
【正文快照】： 精子發(fā)生障礙是引起男性生殖障礙的一個(gè)主要原因[1-2]。精子發(fā)生過(guò)程主要包括精原細(xì)胞有絲分裂、精母細(xì)胞減數(shù)分裂和精子細(xì)胞變態(tài)成形3個(gè)階段[3],其中,每個(gè)階段都有一些睪丸特異性基因發(fā)揮著重要作用,如:精子相關(guān)抗原4樣蛋白(sperm-associated antigen 4-like protein,SPAG4L)

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1065720