本文關(guān)鍵詞：截短弓形蟲(chóng)表面抗原SAG2C的基因克隆、蛋白表達(dá)及其初步應(yīng)用

  更多相關(guān)文章： 弓形蟲(chóng) 表面抗原 克隆 蛋白表達(dá) 免疫反應(yīng)性

【摘要】：目的克隆截短的弓形蟲(chóng)表面抗原SAG2C基因,在大腸埃希菌中表達(dá)SAG2C蛋白,并探討其在弓形蟲(chóng)病診斷中的應(yīng)用。方法對(duì)已知的弓形蟲(chóng)SAG2C基因序列進(jìn)行部分取舍,用RT-PCR技術(shù)從弓形蟲(chóng)Prugniaud(PRU)株的總RNA中擴(kuò)增截短的SAG2基因片段,插入載體pET32a(+)中,轉(zhuǎn)化大腸埃希菌BL21,IPTG誘導(dǎo)表達(dá),應(yīng)用Western blot和ELISA檢測(cè)重組表達(dá)蛋白的免疫反應(yīng)性。用重組SAG2C蛋白ELISA法檢測(cè)弓形蟲(chóng)感染血清特異抗體,觀察初步應(yīng)用效果。結(jié)果從弓形蟲(chóng)PRU株總RNA中擴(kuò)增出截短的SAG2C基因片段,成功構(gòu)建了重組表達(dá)質(zhì)粒pET32a(+)-tSAG2C;該重組質(zhì)粒經(jīng)IPTG誘導(dǎo)能表達(dá)可溶性大小為51ku的SAG2C蛋白。Western blot顯示重組SAG2C能被弓形蟲(chóng)感染小鼠血清識(shí)別;以重組SAG2C蛋白、重組SAG1蛋白及BAG1蛋白ELISA檢測(cè)精神病患者血清弓形蟲(chóng)抗體,陽(yáng)性率分別為8.07%(23/285)、4.56%(13/285)和7.37%(21/285),差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論成功構(gòu)建了重組質(zhì)粒pET32a(+)-tSAG2C,表達(dá)的融合蛋白具有免疫反應(yīng)性,具有用于弓形蟲(chóng)感染診斷的潛在價(jià)值。
【作者單位】： 廣州市花都區(qū)人民醫(yī)院;南方醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生與熱帶醫(yī)學(xué)學(xué)院病原生物學(xué)系;
【關(guān)鍵詞】： 弓形蟲(chóng) 表面抗原 克隆 蛋白表達(dá) 免疫反應(yīng)性
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.31030066)
【分類號(hào)】：R37
【正文快照】： 剛地弓形蟲(chóng)(Toxoplasma gondii)是一種廣泛寄生于人和動(dòng)物的原蟲(chóng),能引起人獸共患弓形蟲(chóng)病。人群中弓形蟲(chóng)抗體陽(yáng)性者并不少見(jiàn),但臨床病例相對(duì)較少,說(shuō)明絕大多數(shù)弓形蟲(chóng)感染均為包囊引起的隱性感染;當(dāng)機(jī)體免疫功能下降或受抑制時(shí),蟲(chóng)體就會(huì)活化,迅速增生繁殖,破壞宿主細(xì)胞而引起多

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本文編號(hào)：1060581