本文關(guān)鍵詞：弓形蟲(chóng)GRA7致密顆粒蛋白與宿主巨噬細(xì)胞蛋白的相互作用

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【摘要】：目的鑒定與弓形蟲(chóng)GRA7致密顆粒蛋白相互作用的宿主巨噬細(xì)胞蛋白組分,并研究蛋白相互作用與感染過(guò)程的相關(guān)性。方法建立基于人源THP-1單核巨噬細(xì)胞系的弓形蟲(chóng)-巨噬細(xì)胞感染模型。以含GST標(biāo)簽的GRA7全長(zhǎng)重組蛋白為誘餌,采用GST沉降體外蛋白相互作用方法 ,捕獲與誘餌相互作用的人THP-1單核巨噬細(xì)胞系成分,采用液相色譜-兩級(jí)質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS/MS)技術(shù)鑒定宿主靶蛋白。采用免疫共沉淀(Co-IP)方法驗(yàn)證其體內(nèi)的相互作用。采用人碳酸酐酶1(h CA1)抗血清為一抗的蛋白質(zhì)印跡(Western blotting)驗(yàn)證捕獲蛋白為宿主h CA1蛋白組分。采用pc DNA3.1(+)真核質(zhì)粒過(guò)表達(dá)宿主靶蛋白的方法研究蛋白相互作用與弓形蟲(chóng)感染巨噬細(xì)胞的相關(guān)性。結(jié)果 GST沉降實(shí)驗(yàn)捕獲的THP-1細(xì)胞蛋白組分主要為相對(duì)分子質(zhì)量為Mr29 000的蛋白,質(zhì)譜鑒定為h CA1。Co-IP實(shí)驗(yàn)證明弓形蟲(chóng)GRA7蛋白與宿主h CA1蛋白在感染過(guò)程中具有顯著體內(nèi)相互作用。THP-1巨噬細(xì)胞內(nèi)過(guò)表達(dá)h CA1基因可顯著增強(qiáng)弓形蟲(chóng)的繁殖速度和納蟲(chóng)泡形成速度,但不影響最終繁殖數(shù)量。結(jié)論弓形蟲(chóng)GRA7致密顆粒蛋白與THP-1巨噬細(xì)胞的h CA1蛋白具有顯著蛋白相互作用,且該相互作用與弓形蟲(chóng)在THP-1巨噬細(xì)胞內(nèi)的繁殖速度呈正相關(guān)。
【作者單位】： 首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京友誼醫(yī)院 北京熱帶醫(yī)學(xué)研究所;北京市熱帶病防治研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京友誼醫(yī)院 北京熱帶醫(yī)學(xué)研究所;
【關(guān)鍵詞】： 剛地弓形蟲(chóng) 致密顆粒蛋白 人碳酸酐酶 蛋白相互作用 納蟲(chóng)泡
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(No.81071375,81301404) 北京市自然科學(xué)基金(No.7132042,7144196) 北京市優(yōu)秀人才培養(yǎng)資助(No.2013D003034000021) 首都醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)-臨床科研合作基金(No.13JL16)~~
【分類號(hào)】：R382.5
【正文快照】： 弓形蟲(chóng)病是由剛地弓形蟲(chóng)感染引起的世界范圍內(nèi)廣泛分布的人獸共患寄生蟲(chóng)病[1,2]。剛地弓形蟲(chóng)的致病機(jī)制復(fù)雜,其中分泌蛋白與宿主細(xì)胞之間的相互作用與感染過(guò)程密切相關(guān)[3]。弓形蟲(chóng)分泌蛋白包括微線體蛋白(microneme protein,MIC)、棒狀體蛋白(rhoptry protein,ROP)和致密顆粒

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本文編號(hào)：1012397