本文關(guān)鍵詞：淋巴細(xì)胞中ZBTB24的功能研究

  更多相關(guān)文章： ZBTB24 免疫缺陷 著絲粒不穩(wěn)定 面部表情異常 IRF4 Blimp-1 細(xì)胞周期

【摘要】：ZBTB24的功能性缺失突變導(dǎo)致了一種先天性免疫缺陷疾病ICF2(免疫缺陷,著絲粒不穩(wěn)定和面部表情異常綜合癥2)。ICF2的主要免疫學(xué)特點是血清中的抗體滴度和記憶性B細(xì)胞數(shù)目的顯著下降,但總B細(xì)胞的數(shù)量沒有明顯變化。ZBTB24屬于ZBTB的蛋白大家族,同家族的其他成員像BCL6等在B細(xì)胞的發(fā)育和功能中有關(guān)鍵的作用。根據(jù)ICF2病人的這些表型以及我們前期研究所發(fā)現(xiàn)的ZBTB24在B細(xì)胞中的高表達(dá)水平,我們推測ZBTB24主要通過影響B(tài)細(xì)胞的功能而參與了體內(nèi)的抗體產(chǎn)生過程。因此,在本論文中我們主要以人的B淋巴瘤細(xì)胞為工具細(xì)胞來探討ZBTB24的生物學(xué)功能。我們在Raji/Daudi細(xì)胞中用特異性的shRNAs下調(diào)內(nèi)源性ZBTB24的表達(dá)水平進(jìn)而顯著抑制了細(xì)胞增殖,這主要是通過抑制細(xì)胞周期(阻滯在G0/1期)而實現(xiàn)的,因其對細(xì)胞凋亡無明顯影響。下調(diào)ZBTB24促進(jìn)了IRF-4和Blimp-1的表達(dá),而這兩個基因在B細(xì)胞的增殖及分化為抗體分泌細(xì)胞等方面都有很重要的作用。用shRNA來阻止ZBTB24下調(diào)所導(dǎo)致的IRF-4表達(dá)水平的上調(diào)逆轉(zhuǎn)了ZBTB24下調(diào)對細(xì)胞增殖的抑制作用,說明ZBTB24主要是通過調(diào)控IRF-4的表達(dá)水平而影響細(xì)胞的增殖能力。我們的實驗結(jié)果還提示ZBTB24對IRF-4表達(dá)水平及B細(xì)胞增殖能力的調(diào)控不依賴于BCL-6,因為其不影響B(tài)CL-6的表達(dá)水平和轉(zhuǎn)錄活性。在T淋巴瘤細(xì)胞Jurkat中,我們發(fā)現(xiàn)下調(diào)ZBTB24也抑制了細(xì)胞增殖,但對IRF-4的表達(dá)無影響。這些數(shù)據(jù)說明淋巴細(xì)胞中ZBTB24通過不同的機(jī)制影響的細(xì)胞的增殖、分化能力�？偟膩碚f,本論文中的實驗結(jié)果不僅為ZBTB24突變的ICF2病人中B細(xì)胞和抗體缺陷的現(xiàn)象提供了一個分子機(jī)制,同時也提示ZBTB24是對B細(xì)胞功能很重要的一個轉(zhuǎn)錄因子。
【關(guān)鍵詞】：ZBTB24 免疫缺陷 著絲粒不穩(wěn)定 面部表情異常 IRF4 Blimp-1 細(xì)胞周期
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R392
【目錄】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-9
• 第一章 前言9-13
• 第二章 材料與方法13-23
• 2.1 實驗材料13-16
• 2.1.1 試劑13
• 2.1.2 蛋白與抗體13-14
• 2.1.3 質(zhì)粒構(gòu)建，shRNA以及病毒包裝14
• 2.1.4 檢測試劑盒14
• 2.1.5 引物14-15
• 2.1.6 原代細(xì)胞以及細(xì)胞株15
• 2.1.7 儀器設(shè)備與耗材15-16
• 2.2 實驗方法16-23
• 2.2.1 SDS-PAGE16
• 2.2.2 Western Blot16-17
• 2.2.3 免疫共沉淀17
• 2.2.4 細(xì)胞增殖實驗17
• 2.2.5 RNA提取17-18
• 2.2.6 RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA18-19
• 2.2.7 Real-time PCR19
• 2.2.8 流式細(xì)胞染色19
• 2.2.9 流式分選19
• 2.2.10 BCA法測蛋白濃度19-20
• 2.2.11 激光共聚焦顯微技術(shù)20
• 2.2.12 胞內(nèi)染色20-21
• 2.2.13 siRNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞21
• 2.2.14 慢病毒感染細(xì)胞21
• 2.2.15 細(xì)胞周期實驗21-22
• 2.2.16 細(xì)胞凋亡實驗22
• 2.2.17 數(shù)據(jù)分析22-23
• 第三章 ZBTB24在細(xì)胞中的定位以及siRNA的篩選23-25
• 3.1 ZBTB24在細(xì)胞中的定位23
• 3.2 篩選下調(diào)ZBTB24的siRNA23-24
• 3.3 本章討論24-25
• 第四章 ZBTB24在B細(xì)胞株中的作用25-38
• 4.1 含ZBTB24特異性shRNA的病毒包裝及下調(diào)效果25-26
• 4.2 在B細(xì)胞株中下調(diào)ZBTB24顯著抑制了細(xì)胞的增殖26-28
• 4.3 在Raji細(xì)胞中下調(diào)ZBTB24對細(xì)胞凋亡無顯著影響28-29
• 4.4 ZBTB24表達(dá)的下調(diào)抑制了細(xì)胞周期G0/1 到S期的轉(zhuǎn)換29
• 4.5 在Raji細(xì)胞中下調(diào)ZBTB24上調(diào)了IRF-4 以及Blimp-1 的表達(dá)29-30
• 4.6 阻止IRF-4 表達(dá)水平的上調(diào)逆轉(zhuǎn)了ZBTB24低表達(dá)Raji細(xì)胞增殖能力的缺陷30-31
• 4.7 下調(diào)ZBTB24對Raji細(xì)胞中CD38和CD138的表達(dá)無影響31-32
• 4.8 ZBTB24對BCL6的表達(dá)和轉(zhuǎn)錄活性無影響32-33
• 4.9 ZBTB24與其他ICF綜合癥相關(guān)基因的關(guān)系33-34
• 4.10 在Raji細(xì)胞中過表達(dá)ZBTB24對細(xì)胞周期沒有影響34-35
• 4.11 本章討論35-38
• 第五章 ZBTB24在T細(xì)胞株中的作用38-43
• 5.1 ZBTB24在Jurkat細(xì)胞細(xì)胞的下調(diào)效果38-39
• 5.2 下調(diào)ZBTB24對Jurkat細(xì)胞增殖有抑制作用39
• 5.3 ZBTB24下調(diào)對Jurkat細(xì)胞的細(xì)胞周期的沒有影響39-40
• 5.4 在Jurkat細(xì)胞中ZBTB24下調(diào)對IRF-4 的表達(dá)沒有影響40-41
• 5.5 本章討論41-43
• 文獻(xiàn)綜述43-51
• 參考文獻(xiàn)51-59
• 英文縮略詞59-60
• 致謝60-62
• 個人簡歷62-63

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