本文關(guān)鍵詞：白念珠菌HSP90與人源HSP90的克隆表達及其C端的比較分析

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【摘要】：目的分別體外表達純化白念珠菌HSP90(CaHSP90)和人源HSP90(hHSP90)并分析C-端序列差異對其體外狀態(tài)下分子聚合度的影響。方法我們將CaHSP90、hHSP90野生型及其C-端酶切堿基序列通過PCR進行擴增并通過NdeI/XhoI酶切位點連接到到pET22b+質(zhì)粒中。將構(gòu)建好的上述質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌E.coli BL21(DE3)中進行表達并通過Ni 2+-NTA柱以及Superdex-200快速柱層析系統(tǒng)(FPLC)純化。所得蛋白通過SDS-PAGE以及分子排阻色譜(SEC)測定分子量和聚合狀態(tài)。結(jié)果通過測序鑒定所有質(zhì)粒構(gòu)建成功,并最終純化得到足夠純度的蛋白進行SEC分析實驗。分析結(jié)果表明野生型CaHSP90和hHSP90在體外具有相似的聚合度,而C-端突變后則存在明顯差異。結(jié)論 CaHSP90和hHSP90的C-端結(jié)構(gòu)域?qū)ζ潴w外聚合狀態(tài)有著不同的影響,CaHSP90的C-端結(jié)構(gòu)域有可能成為CaHSP90抑制劑一個潛在靶點。
【作者單位】： 上海長海醫(yī)院;中國科學院大學;
【關(guān)鍵詞】： 白念珠菌 HSP 蛋白結(jié)構(gòu) 蛋白表達與純化
【基金】：973子課題(2013CB531602)
【分類號】：R379.4
【正文快照】： [Chin J Mycol,2016,11(6):321-326]白念珠菌是一種條件致病菌,近年來隨著抗菌藥物的濫用,白念珠菌的致病率逐年上升。由于白念珠菌對藥物的耐受性越來越強,我們對于白念珠菌的抗藥性研究也不斷深入。研究發(fā)現(xiàn)白念珠菌的HSP90在白念珠菌的致病以及耐藥機制中有重要作用[1]。HS

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