本文關(guān)鍵詞：弧菌外膜蛋白Ompk基因序列分析及其多克隆抗體的制備

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【摘要】：弧菌外膜蛋白(outer membrane protein,OMP)OmpK不僅可激發(fā)機(jī)體的體液免疫和細(xì)胞免疫,而且可在不同血清型菌株之間產(chǎn)生免疫交叉反應(yīng)。本研究利用克隆測(cè)序和查找Gen Bank獲得20株弧菌的Ompk基因序列并構(gòu)建Ompk系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù),對(duì)比分析20株弧菌Ompk基因序列;利用原核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)野生株Vibrio parahaemolyticus B的OmpK,純化OmpK后制備兔多克隆抗體;采用酶聯(lián)免疫吸附分析法和蛋白質(zhì)印跡法(Western-blotting)分別檢測(cè)抗體效價(jià)和特異性。系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)和基因序列比對(duì)結(jié)果顯示Ompk基因在弧菌中高度保守,核苷酸序列相似性在77%以上;原核表達(dá)系統(tǒng)成功表達(dá)了弧菌OmpK,蛋白經(jīng)純化后成功制備的兔多抗效價(jià)達(dá)1∶16 000;Western-blotting實(shí)驗(yàn)證實(shí)抗體具有很好的特異性;OmpK多克隆抗體在弧菌中普遍存在免疫交叉性。因此,弧菌Ompk基因序列分析及其抗體研制,不僅為弧菌快速免疫學(xué)檢測(cè)提供可能性,也為以O(shè)mpK為靶點(diǎn)的水產(chǎn)疫苗研制奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 上海理工大學(xué)醫(yī)療器械與食品學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 弧菌 Ompk 原核表達(dá) 純化 多克隆抗體 免疫學(xué)檢測(cè)
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(31371776) “科技創(chuàng)新行動(dòng)計(jì)劃”長(zhǎng)三角科技聯(lián)合攻關(guān)領(lǐng)域項(xiàng)目(15395810900) 上海市研究生教育創(chuàng)新計(jì)劃項(xiàng)目
【分類(lèi)號(hào)】：R392
【正文快照】： 引文格式:丁承超,謝曼曼,曾海娟,等.弧菌外膜蛋白Ompk基因序列分析及其多克隆抗體的制備[J].食品科學(xué),2016,37(23):141-146.DOI:10.7506/spkx1002-6630-201623024.http://www.spkx.net.cnDING Chengchao,XIE Manman,ZENG Haijuan,et al.Gene sequence analysis and polyclonal

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本文編號(hào)：848895