發(fā)布時間：2017-09-04 05:26

  本文關(guān)鍵詞：miR-1247-5p對Smad2基因的靶向調(diào)控作用

  更多相關(guān)文章： miR--p TGF-β信號通路 Smad基因 腫瘤

【摘要】：目的利用miR-1247-5p過表達模擬物mimics,研究miR-1247-5p對TGF-β信號通路中關(guān)鍵蛋白Smad2的靶向調(diào)控作用。方法合成模擬miR-1247-5p過表達的模擬物mimics,及抑制miR-1247-5p表達的抑制物inhibitors;同時構(gòu)建與miR-1247-5p互補靶基因Smad2的3'非翻譯區(qū),將其克隆到線性化的Report熒光報告載體中。將測序鑒定陽性的report-Smad2 3'-UTR重組質(zhì)粒,與miR-1247-5p的mimics/inhibitors共轉(zhuǎn)染至HEK-293T細胞,通過relative luciferase activity實驗驗證靶向關(guān)系,并通過Western blot實驗進一步檢測Smad2蛋白表達水平。結(jié)果成功構(gòu)建report-Smad2 3'-UTR重組質(zhì)粒,Western blot實驗表明轉(zhuǎn)染miR-1247-5p mimics組中Smad2蛋白表達下調(diào)(P0.05);而轉(zhuǎn)染miR-1247-5p inhibitors組中,Smad2蛋白表達上調(diào)(P0.05)。結(jié)論證實miR-1247-5p直接靶向TGF-β信號通路中關(guān)鍵蛋白Smad2的表達,在蛋白水平對其進行調(diào)控,為進一步研究miRNA在細胞通路中的調(diào)控作用提供了依據(jù)。
【作者單位】： 寧夏醫(yī)科大學檢驗學院;西安市中心血站;寧夏醫(yī)科大學總醫(yī)院;
【關(guān)鍵詞】： miR--p TGF-β信號通路 Smad基因 腫瘤
【基金】：國家自然科學基金(81460368) 寧夏科技支撐項目[寧科計字(2013)20號] 寧夏自然科學基金(NZ-13149)
【分類號】：R363
【正文快照】： microRNA(miRNA)是一類存在于真核生物,長度為18~25 nt的內(nèi)源性小分子RNA,通過與靶基因mRNA 3'端特定序列結(jié)合,從而降解目標mRNA或?qū)ζ溥M行轉(zhuǎn)錄抑制[1]。近年來研究發(fā)現(xiàn),miRNA可分布在肥大細胞、DC和巨噬細胞的分泌物中,參與細胞間多個信號傳導[2]。miRNA通過靶向作用于數(shù)個基

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