本文關(guān)鍵詞：埃博拉病毒GP和VP40蛋白在哺乳動物細胞中的共表達及病毒樣顆粒裝配

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【摘要】：目的:制備基因重組埃博拉病毒樣顆粒,為疫苗研究及埃博拉病毒特異抗原、抗體檢測提供基礎(chǔ)。方法:根據(jù)埃博拉病毒扎伊爾株的GP和VP40蛋白氨基酸序列,以哺乳動物細胞基因表達密碼子偏好性進行基因優(yōu)化設計;化學合成GP和VP40基因片段并分別構(gòu)建于表達質(zhì)粒pcDNA3.1或同時構(gòu)建到具有雙表達單元的質(zhì)粒pBudCE4.1;重組質(zhì)粒經(jīng)lipofectamine2000轉(zhuǎn)染293FT細胞;以Western blot檢測重組蛋白GP和VP40的表達;通過電鏡觀察病毒樣顆粒。結(jié)果:構(gòu)建的重組質(zhì)粒經(jīng)酶切鑒定及測序分析證實構(gòu)建成功;Western blot結(jié)果顯示,共轉(zhuǎn)染分別表達GP和VP40的兩個質(zhì)�；蜣D(zhuǎn)染共表達兩個蛋白的質(zhì)粒都發(fā)現(xiàn)GP特異反應條帶產(chǎn)生,且大小與預期相符,此外,轉(zhuǎn)染共表達質(zhì)粒產(chǎn)生的GP蛋白表達明顯強于兩個質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染,并同時可檢測到VP40的表達;電鏡觀察到典型的絲狀的埃博拉病毒樣顆粒。結(jié)論:在293FT細胞中基因優(yōu)化的埃博拉病毒GP和VP40可有效表達并裝配為病毒樣顆粒,為進一步研究奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 昆明醫(yī)科大學;中國醫(yī)學科學院/北京協(xié)和醫(yī)學院醫(yī)學生物學研究所;云南省重大傳染病疫苗研發(fā)重點實驗室;云南省重大傳染病疫苗工程技術(shù)研究中心;
【關(guān)鍵詞】： 埃博拉病毒 病毒樣顆粒 FT細胞 表達
【基金】：中國醫(yī)學科學院醫(yī)學生物學研究所所級科技計劃(2014IMB02ZD)對本研究的資助
【分類號】：R373
【正文快照】： 埃博拉病毒感染可引起多發(fā)性器官衰竭等癥狀最終導致死亡[1],致死率高達70%~80%[2]。埃博拉病毒自1967年首次發(fā)現(xiàn)以來已引起多次爆發(fā)[3],最近一次發(fā)生于2014年,死亡人數(shù)高達7 373人。目前來看,埃博拉病毒感染存在一定地域限制性[4],但是由于其潛伏期通常為5~12天甚至可達21天,

【相似文獻】

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6 王，

本文編號：772010