本文關鍵詞：產腸毒素性大腸埃希菌K99-987P-F41原核表達載體的構建、表達及其純化

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【摘要】：目的構建產腸毒素性大腸埃希菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)K99-987P-F41原核表達載體,誘導表達后進行純化。方法利用PCR技術,從ETEC基因組DNA中擴增出K99、987P、F41部分基因片段,將3段目的基因融合亞克隆至大腸埃希菌原核表達載體p ET30a(+),構建重組質粒p ET30a(+)-K99-987P-F41,轉化E.coli BL21(DE3)感受態(tài)細胞,IPTG誘導表達,表達的重組蛋白經鎳離子親和層析純化。結果重組表達質粒p ET30a(+)-K99-987P-F41經PCR、酶切及測序鑒定證明構建正確。表達的重組蛋白相對分子質量約60 000,主要以包涵體形式存在,表達量約占菌體總蛋白的63.8%,純度為81.2%,濃度為8.953 mg/ml,可同時被天然和重組抗原多抗識別,具有良好的反應原性。結論 ETEC重組質粒p ET30a(+)-K99-987P-F41可在大腸埃希菌BL21(DE3)中表達,利用鎳離子親和層析柱純化可獲得融合蛋白。
【作者單位】： 黑龍江八一農墾大學食品學院;
【關鍵詞】： 產腸毒素性大腸埃希菌 原核表達 純化
【基金】：黑龍江省農墾總局攻關項目(HNK125B-11-02)
【分類號】：R392-33
【正文快照】： 產腸毒素性大腸埃希菌(enterotoxigenic Esche-richia coli,ETEC)是犢牛腹瀉最重要的病原之一[1-2]。ETEC的毒力因子包括黏附素(也稱菌毛)和腸毒素。黏附素特異性地與宿主小腸黏膜上皮細胞的特異性受體結合,進而定植于小腸黏膜,分泌腸毒素,使小腸黏膜細胞分泌功能增強,吸收功

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