本文關(guān)鍵詞：血小板裂解液對人間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性的實(shí)驗(yàn)研究

  更多相關(guān)文章： 血小板裂解液 骨髓 脂肪 間充質(zhì)干細(xì)胞 細(xì)胞培養(yǎng)

【摘要】：目的:研究血小板裂解液(platelet lysate,PL)對人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymal cells,BMMSC)和脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞(adipose derived mesenchymal stem cell,ATMSC)的生物學(xué)特性的影響,為臨床細(xì)胞治療及再生醫(yī)學(xué)提供科學(xué)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。方法:1、采集新鮮血液,通過反復(fù)凍融法獲得PL。2、采集健康成人骨髓和脂肪組織,分別采用密度梯度離心法和I型膠原酶消化法聯(lián)合細(xì)胞貼壁篩選法,分離得到原代培養(yǎng)的BMMSC和ATMSC。3、采用PL培養(yǎng)原代BMMSC和ATMSC。4、采用倒置相差顯微鏡觀察BMMSC和ATMSC的形態(tài)。5、采用流式細(xì)胞儀檢測鑒定PL培養(yǎng)的BMMSC和ATMSC的CD13、CD29、CD90、CD105、CD14、CD19、CD45、CD34、HLA-ABC及HLA-DR表達(dá)變化。6、采用細(xì)胞計數(shù)法分別計算出每一代BMMSC和ATMSC的細(xì)胞累積群倍數(shù),檢測細(xì)胞的增殖能力。7、采用體外集落形成實(shí)驗(yàn)檢測BMMSC和ATMSC集落形成能力。8、采用阿利新藍(lán)染色法、茜素紅染色法和油紅-O染色法分別檢測BMMSC和ATMSC的成軟骨、成骨和成脂肪的分化能力。9、采用ELISA方法檢測BMMSC和ATMSC分泌細(xì)胞因子IL-6、TNF-α、IL-8及VEGF的水平。結(jié)果:1、經(jīng)PL培養(yǎng)的人BMMSC和ATMSC均呈現(xiàn)較均一的形態(tài)特征,細(xì)胞長梭形,并呈漩渦狀生長及平行排列生長。2、流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果顯示BMMSC和ATMSC具有相似的細(xì)胞表型(p0.05),CD13、CD29、CD90、CD105及HLA-ABC均呈現(xiàn)陽性表達(dá),CD14、CD19、CD45、CD34及HLA-DR均呈現(xiàn)陰性表達(dá)。3、細(xì)胞增殖能力檢測顯示經(jīng)P1~P5的培養(yǎng)ATMSC比BMMSC有更高的細(xì)胞累積群倍數(shù)(p0.05)。4、人BMMSC和ATMSC集落形成能力檢測(p0.05),無統(tǒng)計學(xué)差異。5、體外誘導(dǎo)分化試驗(yàn)顯示BMMSC和ATMSC均具有成軟骨、成骨和成脂肪分化能力。6、人BMMSC和ATMSC均分泌IL-6、TNF-α、IL-8及VEGF,無統(tǒng)計學(xué)差異(p0.05)。結(jié)論:應(yīng)用PL在體外成功地培養(yǎng)擴(kuò)增了BMMSC和ATMSC。經(jīng)PL培養(yǎng)的BMMSC和ATMSC均具有成軟骨、成骨和成脂肪分化能力。BMMSC和ATMSC在細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞表型、集落形成能力和細(xì)胞因子分泌水平等生物學(xué)特性方面無明顯差異。ATMSC比BMMSC有更高的細(xì)胞累積群倍數(shù),ATMSC在體外PL培養(yǎng)體系下更適宜進(jìn)行大規(guī)模的擴(kuò)增。本實(shí)驗(yàn)建立的PL培養(yǎng)體系為ATMSC和BMMSC的體外擴(kuò)增提供了安全和有效的方法。
【關(guān)鍵詞】：血小板裂解液 骨髓 脂肪 間充質(zhì)干細(xì)胞 細(xì)胞培養(yǎng)
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-8
• 前言8-9
• 1.材料和方法9-13
• 2.結(jié)果13-18
• 3.討論18-20
• 4.結(jié)論20
• 5.本研究的創(chuàng)新性及自我評價20
• 參考文獻(xiàn)20-24
• 綜述 無動物源性成分培養(yǎng)基體外擴(kuò)增間充質(zhì)干細(xì)胞24-37
• 參考文獻(xiàn)31-37
• 英文縮略詞表37-38
• 攻讀碩士期間業(yè)績成果38-40
• 致謝40

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