本文關(guān)鍵詞：Wnt1通過上調(diào)SRA和NF-κB參與LPS誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)

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【摘要】：研究背景： 機體受到細(xì)菌感染時,細(xì)菌釋放的LPS(脂多糖)成分可以激發(fā)機體的免疫炎癥反應(yīng)。由LPS激發(fā)的炎癥反應(yīng)涉及了多種炎癥信號通路(包括MAPK,NF-KB等)的激活。在這其中LPS通過結(jié)合于細(xì)胞膜表面的toll樣受體(主要是TLR4)和清道夫受體A類(SRA)激活下游信號分子myd88進而使p65(NF-KB通路主要轉(zhuǎn)錄因子)入核增多,p65入核后增強了TNF-α,IL-6,iNOS的轉(zhuǎn)錄,使炎癥信號進一步擴大。 Wnt通路分為1.經(jīng)典wnt通路2.非經(jīng)典wnt通路3.鈣離子依賴型通路,屬于一類生物體內(nèi)較為保守的信號通路,主要參與了胚胎發(fā)育,細(xì)胞增殖,癌癥發(fā)生等。Wnt1分子屬于wnt經(jīng)典通路的一員。Wnt1由細(xì)胞合成并分泌到胞外后,通過結(jié)合于細(xì)胞膜表面的FZD1,LRP5,LRP6所形成的復(fù)合物受體激活了細(xì)胞質(zhì)內(nèi)β-catenin分子,使β-catenin分子入核后促進TCF1/TCF4黑心錄因子激活,增強對相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄。 以往研究發(fā)現(xiàn),在PC12細(xì)胞(大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞)內(nèi)wnt1通過促進NF-KB激活抑制了細(xì)胞凋亡。但是,wnt通路是否也參與了LPS引起的炎癥反應(yīng)還不甚明了。 目的： 關(guān)于LPS如何通過調(diào)節(jié)SRA以及wnt1激活下游NF-kB的機制還不甚明了。本研究旨在探究wnt1在LPS誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)中的作用,并分析wnt1、SRA和NF-kB三者之間的關(guān)系。 方法： 1)對于THP1細(xì)胞給予PMA激活使其分化為巨噬細(xì)胞后作為所有后續(xù)實驗用的細(xì)胞。用LPS處理后,Western blot檢測細(xì)胞中Wnt1蛋白含量的變化。 2)對THP1細(xì)胞轉(zhuǎn)染W(wǎng)nt1siRNA,或Wntl過表達質(zhì)粒后,用Western blot檢測細(xì)胞中NF-KB蛋白表達量的變化,用ELISA和WB檢測細(xì)胞中炎癥因子IL-6, TNF-α, iNOS的分泌量。 3)將THP1細(xì)胞分別轉(zhuǎn)染W(wǎng)ntlsiRNA或Wnt1過表達質(zhì)粒,檢測處理后的細(xì)胞中SRA受體和TLR4受體的表達情況。對于Wntl過表達的THP1細(xì)胞而言,給予SRAsiRNA轉(zhuǎn)染后,檢測細(xì)胞中細(xì)胞中的NF-KB蛋白表達量。 4)經(jīng)過LPS處理的THP1細(xì)胞轉(zhuǎn)染FZD1siRNA或加入VAX939(p-catenin抑制劑)后,檢測SRA受體蛋白表達量。 結(jié)果： 1)對于THP1細(xì)胞給予PMA和LPS處理后,細(xì)胞中Wnt1蛋白表達上升。 2)對THP1細(xì)胞轉(zhuǎn)染W(wǎng)ntl siRNA,引起NF-kB表達下降和炎癥因子IL-6,TNF-α, iNOS的分泌減少；轉(zhuǎn)染W(wǎng)ntl過表達質(zhì)粒后,THP1細(xì)胞中的NF-kB表達量和炎癥因子IL-6,TNF-α,iNOS的分泌量均上升。 3)對THP1細(xì)胞轉(zhuǎn)染W(wǎng)ntl siRNA,引起細(xì)胞中SRA受體表達下降；給予Wntl過表質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后,SRA表達上升。 4)在LPS處理之前的THP1細(xì)胞先轉(zhuǎn)染FZD1siRNA或加入VAX939(β-catenin抑制劑), SRA受體蛋白表達量較單獨LPS處理下降。 結(jié)論： 1. wnnt1蛋白參與了LPS引起的NF-KB激活,炎癥因子的分泌。 2. wnt1可以調(diào)節(jié)SRA受體(介導(dǎo)了LPS引起的NF-KB激活)的表達。 3. wnt1與SRA在細(xì)胞膜上存在著共定位,wnt1也可以通過SRA受體激活NF-KB激活。
【關(guān)鍵詞】：脂多糖(LPS) Wnt通路 清道夫受體A(SRA) NF-KB
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R363
【目錄】：

• 致謝4-5
• 中文摘要5-8
• Abstract8-11
• 縮略語11-12
• 目錄12-13
• 1 前言13-14
• 2 材料和方法14-22
• 2.1 實驗材料14-17
• 2.2 實驗方法17-22
• 3 結(jié)果22-28
• 3.1 LPS處理和PMA處理可以促進THP-1細(xì)胞wnt1的表達22-23
• 3.2 Wnt1激活NF-KB和炎癥因子23-24
• 3.3 Wnt1通過誘導(dǎo)SRA表達參與LPS介導(dǎo)的NF-KB活化24-26
• 3.4 Wnt1通過其經(jīng)典通路誘導(dǎo)SRA表達26-28
• 4 討論28-30
• 參考文獻30-32
• 綜述32-40
• 參考文獻37-40
• 作者簡介及科研成果40

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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本文編號：740569