本文關鍵詞：RNA解旋酶Rig-I對巨噬細胞的影響及作用機制研究

  更多相關文章： Rig-I 巨噬細胞 天然免疫 Rig-I 細胞因子 TLR4信號通路

【摘要】：第一部分Rig-I對巨噬細胞的數(shù)量及凋亡的影響RIG-I(retinoic acid-inducible gene-I)最初是在全反式維甲酸(all trans-retinoic acid,ATRA)誘導急性早幼粒細胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)細胞系NB4分化過程中被發(fā)現(xiàn)顯著上調的基因。目前普遍認為,Rig-I是細胞質內病原模式識別受體的一種,通過特異性識別外源RNA在宿主抗病毒先天免疫功能中發(fā)揮重要作用。在病毒感染情況下,Rig-I通過其RD結構域識別相應病毒RNA,與下游信號分子IPS-1(Interferon-beta promoter stimulator 1,MAVS/Cafrdif/VISA)發(fā)生相互作用,從而激活下游的IRF3(IFN regulatory factor 3)和NF-κB信號通路,產生I型干擾素和炎癥因子,抵抗病毒入侵。但在我們以往的研究中,意外發(fā)現(xiàn)Rig-I基因缺失小鼠的抗細菌免疫能力低下,易發(fā)生條件性致病菌感染。Rig-I基因剔除純合子小鼠由于B細胞分化缺陷和免疫球蛋白轉換受阻導致眼部及頸部皮膚易發(fā)生條件性致病菌-木糖型葡萄球菌(S.xylosus)感染。另外Rig-I基因剔除小鼠容易發(fā)生結腸炎、T細胞活化缺陷和粒細胞的過度增殖。這說明Rig-I在抗病毒以外,在細菌免疫反應中也發(fā)揮重要作用。另外細胞培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)Rig-I可以通過調節(jié)GTP酶家族Rac/Cdc42的活性來影響細胞骨架蛋白actin的重組,從而促進巨噬細胞對細菌的吞噬能力,Rig-I基因剔除小鼠對E.coli的吞噬能力減弱。巨噬細胞是天然免疫免疫系統(tǒng)防御體系的重要一員。我們利用現(xiàn)有的Rig-I基因剔除小鼠模型,采用流式細胞術的方法,對小鼠的腹腔巨噬細胞總數(shù)和凋亡以及大巨噬細胞(Large peritioneal macrophages,LPM)和小巨噬細胞(Small peritoneal macrophages,SPM)的數(shù)量進行分析。與野生型小鼠相比,Rig-I基因敲除小鼠腹腔巨噬細胞的總數(shù)明顯減少、凋亡增加以及腹腔巨噬細胞LPM和SPM的數(shù)量上都發(fā)生顯著減少。這說明Rig-I對小鼠的腹腔巨噬細胞的數(shù)量起著重要調節(jié)作用,這可能與Rig-I基因敲除的小鼠易發(fā)生條件致病菌感染存在某種的聯(lián)系。第二部分Rig-I對LPS誘導的巨噬細胞增殖、凋亡及功能的作用研究位于革蘭氏陰性菌細胞壁外膜的脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)是巨噬細胞的潛在激活劑。LPS通過激活TLR4啟動天然免疫反應。本研究我們以LPS誘導巨噬細胞為模型,探討Rig-I基因對LPS誘導巨噬細胞增殖、凋亡和細胞因子分泌等生物學功能的影響及其作用機制。以不同劑量的LPS刺激Rig-I基因沉默和過表達的小鼠巨噬細胞系Raw264.7細胞,采用CCK8和流式細胞術檢測細胞的生長狀態(tài);采用q PCR方法檢測細胞因子TNF-α、IL-10、IL-1和IL-6相關基因的表達水平;利用transwell檢測巨噬細胞的遷移;對巨噬細胞與細胞外基質的粘附作用進行分析;采用Western blot方法檢測LPS誘導的TLR4信號通路的相關蛋白表達水平。CCK8和流式細胞術結果顯示Rig-I促進巨噬細胞的增殖并抑制LPS誘導的細胞凋亡,q PCR結果表明Rig-I促進巨噬細胞中TNF-α、IL-10、IL-1和IL-6基因的表達。進一步實驗證實Rig-I通過激活AKT及其下游蛋白p-38、NF-κB和Bcl-x L等抑制細胞凋亡并促進細胞因子的表達。因此,本研究首次證實了Rig-I可通過AKT信號通路對LPS誘導的巨噬細胞增殖、凋亡及功能進行調節(jié)。
【關鍵詞】：Rig-I 巨噬細胞 天然免疫 Rig-I 細胞因子 TLR4信號通路
【學位授予單位】：上海交通大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R392
【目錄】：

• 摘要5-6
• 英文摘要6-12
• 中英文縮略詞對照表12-15
• 第一部分 Rig-I對巨噬細胞的數(shù)量及凋亡的影響15-32
• 1. 引言15-17
• 2. 實驗材料17-20
• 2.1 主要生化與分子細胞生物學試劑17-18
• 2.2 主要溶液配方18
• 2.3 主要儀器設備18-19
• 2.4 實驗動物19
• 2.5 PCR引物設計與合成19-20
• 3. 實驗方法20-25
• 3.1 鼠尾DNA的提取20
• 3.2 Rig-I基因敲除老鼠的鑒定20-21
• 3.3 小鼠腹腔巨噬細胞的提取和培養(yǎng)21-22
• 3.4 腹腔巨噬細胞的凋亡22
• 3.5 腹腔巨噬細胞比例的檢測22
• 3.6 腹腔巨噬細胞的分群22-23
• 3.7 RT-PCR檢測凋亡相關基因的表達水平23-25
• 3.8 統(tǒng)計分析25
• 4. 實驗結果25-29
• 4.1 Rig-I基因增加腹腔巨噬細胞的比例25-26
• 4.2 Rig-I基因抑制腹腔巨噬細胞的凋亡26-27
• 4.3 Rig-I基因對腹腔巨細胞的分群發(fā)揮重要作用27-29
• 5. 討論29-31
• 6. 本部分總結31-32
• 第二部分 Rig-I對LPS誘導的巨噬細胞增殖，凋亡及功能的作用研究32-62
• 1. 引言32-39
• 2. 實驗材料39-42
• 2.1 材料39
• 2.2 主要化學與分子生物學實驗試劑39-40
• 2.3 主要試劑配方40
• 2.4 PCR引物設計與合成40-41
• 2.5 實驗儀器41-42
• 3. 實驗方法42-48
• 3.1 細胞復蘇，培養(yǎng)，凍存和計數(shù)42
• 3.2 質粒提取，純化和酶切鑒定42-44
• 3.3 Rig-I基因沉默Raw264.7 細胞株構建44
• 3.4 Rig-I高表達Raw264.7 細胞株構建44
• 3.5 LPS處理Raw264.7 細胞株44-45
• 3.6 細胞增殖-毒性檢測試劑盒（CCK8 ）檢測細胞增殖45
• 3.7 流式細胞術檢測細胞凋亡45
• 3.8 qPCR檢測細胞因子的表達量45-46
• 3.9 細胞遷移實驗46
• 3.10 細胞粘附試驗46-47
• 3.11 Western Blot47
• 3.12 統(tǒng)計分析47-48
• 4. 結果48-58
• 4.1 Rig-I基因促進巨噬細胞的增殖48-49
• 4.2 Rig-I基因抑制LPS誘導的巨噬細胞凋亡49-50
• 4.3 Rig-I促進LPS誘導的巨噬細胞細胞因子的表達50-52
• 4.4 Rig-I促進LPS誘導的巨噬細胞的遷移52-53
• 4.5 Rig-I促進LPS誘導的巨噬細胞與細胞外基質的粘附作用53-55
• 4.6 Rig-I促進LPS誘導的AKT磷酸化和下游NF-κB通路的激活55-58
• 5. 討論58-61
• 6. 本部分結論61-62
• 參考文獻62-68
• 致謝68-71
• 攻讀碩士期間發(fā)表的學術論文71

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 ;豚鼠巨噬細胞經P_(204)處理后的抗石英細胞毒作用[J];國外醫(yī)學參考資料(衛(wèi)生學分冊);1976年04期

2 鄧俠進;;巨噬細胞的抗癌作用[J];遵義醫(yī)學院學報;1979年02期

3 陸天才;;疾病對肺巨噬細胞的影響[J];煤礦醫(yī)學;1982年01期

4 郭瑞清;祝彼得;;一種分離巨噬細胞的簡單方法[J];濱州醫(yī)學院學報;1990年02期

5 謝志堅;巨噬細胞異質性[J];醫(yī)學綜述;2001年06期

6 饒艷;運動及神經內分泌對巨噬細胞功能的調節(jié)[J];體育與科學;2002年05期

7 朱金元;;吸煙對肺巨噬細胞的影響[J];浙江醫(yī)學教育;2003年01期

8 張俊峰;過氧化物酶體增殖物激活受體與單核/巨噬細胞系[J];醫(yī)學綜述;2004年03期

9 韋錦學;顧軍;;巨噬細胞的激活誘導死亡[J];生命科學;2006年02期

10 李曉曦;郭寧;曹雪濤;;腫瘤相關巨噬細胞促進腫瘤生長與轉移的研究現(xiàn)狀[J];中國腫瘤生物治療雜志;2008年01期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 史玉玲;王又明;豐美福;;巨噬細胞激活作用的研究[A];中國細胞生物學學會第五次會議論文摘要匯編[C];1992年

2 吳國明;周輝;;巨噬細胞和創(chuàng)傷纖維化[A];2009年浙江省骨科學學術年會論文匯編[C];2009年

3 李奇;王海杰;;透明質酸對于淋巴結巨噬細胞運動的影響[A];解剖學雜志——中國解剖學會2002年年會文摘匯編[C];2002年

4 劉革修;歐大明;劉軍花;黃紅林;廖端芳;;丙丁酚在體外能抑制巨噬細胞脂質氧化介導的低密度脂蛋白氧化并調節(jié)氧化巨噬細胞的分泌功能[A];面向21世紀的科技進步與社會經濟發(fā)展（下冊）[C];1999年

5 葉金善;楊麗霞;郭瑞威;;環(huán)氧化酶-2/前列腺素E_2在血管緊張素Ⅱ刺激巨噬細胞表達細胞外基質金屬蛋白酶誘導因子中的作用[A];第十三次全國心血管病學術會議論文集[C];2011年

6 秦帥;陳希;孔德明;;構建由綠色熒光標記巨噬細胞的轉基因斑馬魚系[A];貴州省中西醫(yī)結合內分泌代謝學術會論文匯編[C];2012年

7 武劍華;徐惠綿;;腫瘤相關巨噬細胞在胃癌中的相關研究[A];第9屆全國胃癌學術會議暨第二屆陽光長城腫瘤學術會議論文匯編[C];2014年

8 何軍;;血凝素樣氧化型低密度脂蛋白受體升高巨噬細胞內膽固醇水平[A];中華醫(yī)學會第11次心血管病學術會議論文摘要集[C];2009年

9 宋盛;周非凡;邢達;;PDT誘導的凋亡細胞對巨噬細胞NO合成的影響[A];第七屆全國光生物學學術會議論文摘要集[C];2010年

10 張磊;朱建華;黃元偉;姚航平;;血管緊張素Ⅱ對巨噬細胞(THP-1重細胞)凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體表達的影響[A];浙江省免疫學會第五次學術研討會論文匯編[C];2004年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 通訊員 李靜 記者 胡德榮;惡性腫瘤巨噬細胞未必皆“惡人”[N];健康報;2014年

2 蘭克;以嘗試用巨噬細胞治癱瘓[N];科技日報;2000年

3 薛佳;免疫系統(tǒng)——人體的“衛(wèi)士”[N];保健時報;2009年

4 記者 胡德榮;鐵泵蛋白“維穩(wěn)”鐵代謝作用首次闡明[N];健康報;2011年

5 侯嘉 何新鄉(xiāng);硒的神奇功能[N];中國食品質量報;2003年

6 唐穎 倪兵 陳代杰;巨噬細胞泡沫化抑制劑研究快步進行[N];中國醫(yī)藥報;2006年

7 劉元江;新發(fā)現(xiàn)解釋腫瘤為何易成“漏網之魚”[N];醫(yī)藥經濟報;2007年

8 本報記者 侯嘉 通訊員 何新鄉(xiāng);今天你補硒了嗎[N];醫(yī)藥經濟報;2003年

9 左志剛;升血小板藥使用注意[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報;2007年

10 記者 許琦敏;“鐵泵”蛋白幫助回收鐵元素[N];文匯報;2011年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 周赤燕;巨噬細胞MsrA對動脈粥樣硬化的干預研究[D];武漢大學;2013年

2 章桂忠;TIPE2蛋白調控細胞增殖和炎癥的機制研究[D];山東大學;2015年

3 張瑜;DKK1抑制巨噬細胞內脂質沉積及其相關分子機制[D];山東大學;2015年

4 孟濤;異丙酚對心臟收縮功能的抑制作用及其對巨噬細胞分泌功能調節(jié)的機制研究[D];山東大學;2015年

5 周興;基于酵母微囊構建新型口服巨噬細胞靶向遞送系統(tǒng)的研究[D];第三軍醫(yī)大學;2015年

6 蔣興偉;Tim-3對巨噬細胞極化的調控機制研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院;2015年

7 劉伯玉;清道夫受體A介導小鼠巨噬細胞吞噬鉤端螺旋體研究[D];上海交通大學;2013年

8 楊紹俊;miRNA-155介導ESAT-6誘導巨噬細胞凋亡的分子機制及其在結核診斷中的作用[D];第三軍醫(yī)大學;2015年

9 翟光耀;單核/巨噬細胞Ly6C~(low)亞群在心肌梗死后瘢痕形成期的抗炎特性研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2014年

10 韓露;TRB3介導的脂肪組織巨噬細胞極化與糖尿病冠狀動脈病變關系的研究[D];山東大學;2015年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張譯丹;鹽皮質激素受體拮抗劑調控巨噬細胞表型對實驗性矽肺的作用[D];河北醫(yī)科大學;2015年

2 盧文冉;HCV core蛋白作用的巨噬細胞培養(yǎng)上清對肝細胞生物學性狀的影響[D];河北醫(yī)科大學;2015年

3 李文建;載脂蛋白E影響巨噬細胞因子表達及分型的機制研究[D];河北醫(yī)科大學;2015年

4 曹爽;高糖對巨噬細胞TLR4信號轉導的調節(jié)作用[D];河北醫(yī)科大學;2015年

5 寧程程;腫瘤相關巨噬細胞在子宮內膜癌雌激素敏感性中的作用及機制研究[D];復旦大學;2014年

6 高龍;PLD4在腫瘤相關巨噬細胞抑制結腸癌增殖中的作用研究[D];成都醫(yī)學院;2015年

7 丁弋娜;TLR4在肺癌相關巨噬細胞極性轉化及其調控機制的研究[D];杭州師范大學;2016年

8 袁震;砷對巨噬細胞和肝細胞膽固醇流出及相關基因ABCA1和ABCG1表達的影響[D];杭州師范大學;2016年

9 李曉琴;Fc99抑制單核/巨噬細胞表達Tenascin-C及緩解關節(jié)炎癥狀的研究[D];南京大學;2014年

10 王凱凱;綠豆肽的結構鑒定及對小鼠巨噬細胞免疫活性物質的影響作用研究[D];黑龍江八一農墾大學;2016年

，

本文編號：734272