本文關(guān)鍵詞：不同品系大鼠糖皮質(zhì)激素性骨質(zhì)疏松模型研究

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【摘要】：目的:1.比較近交系和封閉群wistar大鼠糖皮質(zhì)激素性骨質(zhì)疏松(GIOP)的成模效應(yīng),探討以近交系wistar大鼠制備GIOP模型的可行性。2.基于GIOP大鼠考察糖皮質(zhì)激素對骨髓細(xì)胞誘導(dǎo)分化能力的影響,探討糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)GIOP的發(fā)生機(jī)制。3.探討阿魏酸鈉對大鼠GIOP的治療作用。方法:1.動物分組:(1)GIOP造模實驗:SPF級雌性3月齡近交系和封閉群wistar大鼠各32只,隨機(jī)各均分為4組:對照(C)組、低頻(L)組、中頻(M)組和高頻(H)組。(2)阿魏酸鈉治療實驗:SPF級3月齡封閉群wistar大鼠30只,隨機(jī)均分5組:對照(A-C)組、模型(A-G)組、阿魏酸鈉低劑量(A-L)組、阿魏酸鈉中劑量(A-M)組和阿魏酸鈉高劑量(A-H)組。2.給藥:(1)GIOP造模實驗:C組以N.S肌注3次/w;L、M、H組分別予以Dex 1mg/kg肌注、1、3、5次/w,共90d。(2)阿魏酸鈉治療實驗:A-C組以N.S肌注3次/w;其余各組分別肌注Dex 1mg/kg、5次/w,共90d,再停藥10d后,A-G組肌注N.S 20d;A-L組、A-M組和A-H組分別肌注阿魏酸鈉20 mg/kg/d、40 mg/kg/d、80mg/kg/d,共20d。大鼠處死前間隔10d分別以鈣黃綠素作雙熒光標(biāo)記。3.骨組織形態(tài)計量學(xué)測定:取左側(cè)脛骨上段,進(jìn)行不脫鈣骨組織包埋,用骨組織形態(tài)計量學(xué)方法測量靜態(tài)參數(shù)、動態(tài)參數(shù)、成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞參數(shù)以及及生長板參數(shù)。4.骨生物力學(xué)測定:取左側(cè)股骨測量長度并進(jìn)行三點(diǎn)彎曲試驗;取第五腰椎進(jìn)行壓縮試驗,分別測量最大載荷、最大應(yīng)力、彈性載荷、斷裂吸收量。5.全骨髓細(xì)胞培養(yǎng)及分化誘導(dǎo):取右股骨作全骨髓細(xì)胞培養(yǎng),采用貼壁篩選法分離單核細(xì)胞后,誘導(dǎo)懸浮單核細(xì)胞向破骨細(xì)胞(OC)定向分化,并以抗酒石酸性磷酸酶染色法鑒定和檢測oc;用牛骨片骨吸收陷窩法檢測oc骨吸收功能,用油紅染色法檢測骨髓細(xì)胞中的脂肪細(xì)胞數(shù)。結(jié)果:1.近交系wistar大鼠giop造模:(1)體重平均增長率:c組和l組為正增長,m組和h組為負(fù)增長。(2)靜態(tài)參數(shù):與c組相比,l、m、h組骨小梁面積(%tb.at)、骨小梁寬度(tb.th)、骨小梁數(shù)量(tb.n)和骨小梁分離度(tb.sp)都沒有明顯變化。(3)動態(tài)參數(shù),與c、l和m相比,h組mar、%l.pm、bfr/tv、bfr/bv和bfr/bs明顯減小。(4)成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞參數(shù),與c組相比,l組破骨細(xì)胞貼壁周長百分?jǐn)?shù)(%oc.s/bs)顯著減少;m組單位骨組織破骨細(xì)胞百分?jǐn)?shù)(oc.n/bs)和%oc.s/bs顯著減少;h組單位ob.n/bs、%ob.s/bs和%oc.s/bs顯著減少。與l組相比,m組%ob.s/bs和oc.n/bs顯著減少;h組ob.n/bs和%ob.s/bs顯著減少,與m組相比,h組ob.n/bs和%ob.s/bs顯著減少。(5)生長板參數(shù):生長板寬(g.p.wi)與c組相比,m組和h組明顯減小;與l組相比,m組和h組明顯減小。退行細(xì)胞高度(d.c.h)與c組相比,l組明顯增大;m、h組沒有顯著變化。(6)三點(diǎn)彎曲試驗參數(shù):與c組相比,l組最大載荷和彈性載荷明顯降低;m組最大載荷明顯降低、最大載荷和股骨長度明顯減小;h組最大載荷、彈性載荷和股骨長度明顯降低,最大應(yīng)力和斷裂吸收量明顯減小。與l組相比,m組股骨長度明顯減小;h組最大載荷、最大應(yīng)力、彈性載荷、斷裂吸收量和股骨長度明顯減小。與m組相比,h組最大載荷和股骨長度明顯減小。(7)壓縮試驗參數(shù),與c組相比,h組斷裂吸收量和骨材料韌性明顯減小。與l組相比,h組斷裂吸收量明顯減小。2.封閉群wistar大鼠giop造模:(1)體重平均增長率:c、l和m組為正增長,h組為負(fù)增長。(2)靜態(tài)參數(shù):與c組相比,m組tb.n明顯減少、h組%tb.at、tb.n和tb.th明顯減少;與l組相比,m組%tb.at和tb.n明顯減小、tb.sp明顯增大、tb.n明顯減少;h組%tb.at、tb.n和tb.th明顯減小、tb.sp明顯增大;與m組相比,h組tb.th明顯減少。(3)動態(tài)參數(shù):與c組相比,h組mar、%l.pm、bfr/tv、bfr/bv和bfr/bs明顯減小,與l組相比,m組和h組mar、bfr/tv、bfr/bv和bfr/bs明顯減小。與m組相比,h組mar、%l.pm和bfr/bs明顯減小。(4)成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞參數(shù):與c組相比,m組和h組ob.n/bs和%ob.s/bs顯著減少,oc.n/bs和%oc.s/bs顯著增加;與l組比較,m組和h組ob.n/bs和%ob.s/bs顯著減少,oc.n/bs和%oc.s/bs顯著增加;與m組比較,h組%ob.s/bs顯著減少。(5)生長板參數(shù):g.p.wi,與c組相比,m組和h組明顯減小;與l組相比,m組和h組明顯減小。與m組比較,h組g.p.wi明顯減小。d.c.h,與c組和l組相比,m和h組明顯;與m組相比,h組d.c.h明顯減小。(6)三點(diǎn)彎曲試驗參數(shù):與c組相比,m組最大載荷、彈性載荷和股骨長度明顯降低;h組最大載荷、最大應(yīng)力和斷裂吸收量明顯降低;彈性載荷和股骨長度明顯減小;與l組相比,m組斷裂吸收量和股骨長度明顯減小;h組彈性載荷、斷裂吸收量和股骨長度明顯減小。(7)壓縮試驗參數(shù):與c組相比,l最大載荷、斷裂吸收量、最大應(yīng)力和骨材料韌性明顯減小;m組斷裂吸收量、最大應(yīng)力和骨材料韌性明顯減小,最大載荷明顯降低;h組斷裂吸收量、最大應(yīng)力和骨材料韌性明顯減小,最大載荷明顯降低。與l組相比,h組最大載荷明顯減小。與m組相比,h組最大載荷明顯減小。3.giop模型大鼠全骨髓細(xì)胞的培養(yǎng)及分化誘導(dǎo):(1)脂肪細(xì)胞數(shù):與c相比,l組未見到脂肪細(xì)胞;m組和h組明顯增多。與l組相比,m組和h組明顯增多。(2)破骨細(xì)胞數(shù):與c組相比,l和m組沒有明顯變化,h組明顯增多。與l組相比,m組沒有明顯變化,h組明顯增多。(3)破骨細(xì)胞骨吸收陷窩數(shù):與c組相比,l和m組沒有明顯變化,h組明顯增多。與l組相比,m組沒有明顯變化,h組明顯增多。(4)破骨細(xì)胞骨吸收陷窩面積:與c組相比,l和m組沒有明顯變化,h組明顯增多。與l組相比,m組沒有明顯變化,h組明顯增多。4.阿魏酸鈉對大鼠giop的治療作用:(1)靜態(tài)參數(shù):與a-c組相比,a-g組tb.at、tb.th、tb.n明顯減少,tb.sp增大。與a-g組相比,l組tb.th明顯增加;m、h組tb.at、tb.th、tb.n明顯增加,tb.sp明顯減小。(2)成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞參數(shù):與a-c組相比,a-g組ob.n/bs、oc.n/bs以及%ob.s/bs均顯著增加。與a-g組相比:阿魏酸鈉各組均無明顯變化。(3)動態(tài)參數(shù):與a-c組相比,a-g組%l.pm、bfr/bv和bfr/bs明顯增大。與a-g組相比,a-m和a-h組bfr/tv明顯增加。(4)生長板參數(shù):與a-c組相比:a-g組g.p.wi明顯增大,與a-g組相比,阿魏酸各組g.p.wi、d.c.h均沒有明顯變化。結(jié)論:1.以Dex高頻給藥90天,封閉群wistar大鼠脛骨上段骨量減少且骨形成抑制;結(jié)構(gòu)破壞使力學(xué)性能下降,表現(xiàn)GIOP的典型改變,但近交系wistar大鼠脛骨上段在成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞減少、動態(tài)骨形成抑制以及骨結(jié)構(gòu)破壞使骨力學(xué)性能下降的同時,靜態(tài)骨量增加,沒有表現(xiàn)GIOP典型的低骨量效應(yīng)。提示:兩品系大鼠wistar大鼠脛骨骨組織對糖皮質(zhì)激素的藥物效應(yīng)不同,是否與大鼠基因易感性差異有關(guān)尚有待探討。2.糖皮質(zhì)激素在體內(nèi)可以促進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向脂肪細(xì)胞分化,從而抑制了向成骨細(xì)胞的分化,同時,促進(jìn)骨髓中單核細(xì)胞向破骨細(xì)胞分化并增強(qiáng)破骨細(xì)胞骨吸收功能,在GIOP的形成機(jī)制中起關(guān)鍵作用。3.糖皮質(zhì)激素長期用藥90天后,停藥30天,骨量減少和骨結(jié)構(gòu)破壞并未有效恢復(fù),但應(yīng)用阿魏酸鈉治療,可以促進(jìn)骨轉(zhuǎn)化而增加骨量并改善骨小梁結(jié)構(gòu)。
【關(guān)鍵詞】：封閉群wistar大鼠 近交系wistar大鼠 GIOP造模 骨形態(tài)計量學(xué) 骨生物力學(xué) 全骨髓細(xì)胞培養(yǎng)和分化誘導(dǎo) 阿魏酸鈉
【學(xué)位授予單位】：廣東藥科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R580;R-332
【目錄】：

• 中文摘要7-11
• Objective11-16
• 前言16-21
• 第一部分 兩品系大鼠糖皮質(zhì)激素性骨質(zhì)疏松模型制備21-55
• 1 材料、試劑與動物21-24
• 1.1 藥物、試劑及儀器21
• 1.2 試劑配制21-24
• 1.3 實驗動物24
• 1.3.1 近交系Wistar大鼠24
• 1.3.2 封閉群Wistar大鼠分組24
• 2 實驗方法24-34
• 2.1 動物分組24-25
• 2.2 動物給藥及取材25
• 2.3 骨組織切片制備25-27
• 2.4 骨形態(tài)計量學(xué)檢測27-31
• 2.4.1 靜態(tài)參數(shù)27-29
• 2.4.2 動態(tài)參數(shù)29-30
• 2.4.3 骨組織細(xì)胞參數(shù)30-31
• 2.4.4 生長板參數(shù)31
• 2.5 骨生物力學(xué)測定31-33
• 2.5.1 股骨三點(diǎn)彎曲試驗31-33
• 2.5.2 腰椎骨壓縮試驗33
• 2.6 統(tǒng)計學(xué)分析33-34
• 3 結(jié)果34-55
• 3.1 近交系大鼠GIOP造模制備34-44
• 3.1.1 體質(zhì)量變化34-35
• 3.1.2 PTM靜態(tài)參數(shù)變化35-36
• 3.1.3 PTM動態(tài)參數(shù)變化36-38
• 3.1.4 PTM成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞參數(shù)變化38-40
• 3.1.5 PTM生長板參數(shù)變化40-42
• 3.1.6 股骨三點(diǎn)彎曲試驗參數(shù)變化42-43
• 3.1.7 腰椎壓縮試驗參數(shù)變化43-44
• 3.2 封閉群大鼠GIOP模型制備44-53
• 3.2.1 體質(zhì)量變化44-45
• 3.2.2 PTM靜態(tài)參數(shù)變化45-46
• 3.2.3 PTM動態(tài)參數(shù)變化46-48
• 3.2.4 PTM成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞參數(shù)變化48-50
• 3.2.5 PTM生長板參數(shù)變化50-52
• 3.2.6 股骨三點(diǎn)彎曲試驗參數(shù)變化52-53
• 3.2.7 腰椎壓縮試驗參數(shù)變化53
• 3.3 小結(jié)53-55
• 第二部分 糖皮質(zhì)激素性骨質(zhì)疏松模型大鼠全骨髓細(xì)胞的培養(yǎng)及分化誘導(dǎo)55-64
• 1 材料、試劑與動物55-58
• 1.1 藥物、試劑及儀器55-56
• 1.2 實驗試劑配制56-57
• 1.3 實驗動物57-58
• 2 實驗方法58-60
• 2.1 骨髓細(xì)胞培養(yǎng)58
• 2.2 脂肪細(xì)胞檢測58
• 2.3 破骨細(xì)胞分化誘導(dǎo)58-59
• 2.4 破骨細(xì)胞骨吸收檢測59-60
• 3 結(jié)果60-64
• 3.1 脂肪細(xì)胞檢測60
• 3.2 破骨細(xì)胞檢測60-63
• 3.2.1 破骨細(xì)胞的形態(tài)和數(shù)量60-61
• 3.2.2 破骨細(xì)胞骨吸收陷窩的形態(tài)和數(shù)量61-63
• 3.3 小結(jié)63-64
• 第三部分 阿魏酸鈉治療糖皮質(zhì)激素性骨質(zhì)疏松大鼠的實驗研究64-71
• 1 材料、試劑與動物64
• 1.1 藥品、試劑及儀器64
• 1.2 實驗動物64
• 2 實驗方法64-65
• 2.1 動物分組、給藥和取材64-65
• 2.1.1 動物分組和給藥64-65
• 2.1.2 取材65
• 2.2 骨形態(tài)計量學(xué)檢測65
• 3 結(jié)果65-71
• 3.1 阿魏酸對GIOP大鼠PTM靜態(tài)參數(shù)的影響65-67
• 3.2 阿魏酸對GIOP大鼠PTM動態(tài)參數(shù)的影響67-69
• 3.3 阿魏酸對GIOP大鼠PTM成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞數(shù)量的影響69-70
• 3.4 阿魏酸對GIOP大鼠PTM生長板的影響70-71
• 3.5 小結(jié)71
• 討論71-76
• 1 GIOP模型動物的選擇與動物模型的建立71-72
• 2 糖皮質(zhì)激素對兩品系大鼠體質(zhì)量變化的影響72
• 3 兩品系大鼠GIOP造模骨組織形態(tài)計量學(xué)參數(shù)的比較及其模型評價意義72-74
• 3.1 靜態(tài)參數(shù)72-73
• 3.2 動態(tài)參數(shù)73
• 3.3 成骨細(xì)胞破骨細(xì)胞參數(shù)73
• 3.4 生長板參數(shù)73-74
• 4 兩品系大鼠GIOP造模骨生物力學(xué)參數(shù)比較及其在模型評價中的意義74
• 4.1 股骨三點(diǎn)彎曲試驗參數(shù)74
• 4.2 腰椎骨壓縮試驗參數(shù)74
• 5 糖皮質(zhì)激素對大鼠骨髓細(xì)胞分化的影響74-75
• 5.1 骨髓細(xì)胞向破骨細(xì)胞分化74-75
• 5.2 骨髓細(xì)胞向脂肪細(xì)胞分化75
• 6 阿魏酸鈉治療GIOP模型大鼠的藥效及機(jī)制75-76
• 6.1 阿魏酸鈉對骨量和骨結(jié)構(gòu)的影響75
• 6.2 阿魏酸鈉對骨重建影響75-76
• 結(jié)論76-77
• 參考文獻(xiàn)77-82
• 綜述82-88
• 前言82
• 1 GIOP病理生理變化82
• 2 GIOP流行病學(xué)82-83
• 3 GIOP診斷83-84
• 3.1 骨密度測量診斷GIOP83
• 3.2 疾病對GIOP影響83
• 3.3 鈣和維生素D調(diào)節(jié)83-84
• 4 GIOP治療84-85
• 4.1 雙膦酸鹽對GIOP影響84
• 4.2 特立帕肽對GIOP影響84
• 4.3 狄諾塞麥對GIOP影響84
• 4.4 雷洛昔芬對GIOP影響84-85
• 5 存在問題及展望85-86
• 參考文獻(xiàn)86-88
• 附錄一88-89
• 附錄二89-90
• 致謝90

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本文編號：649353