本文關(guān)鍵詞：新型疫苗佐劑低分子量肝素鈉及帕米膦酸佐劑效應(yīng)研究

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【摘要】：在疫苗的使用中,佐劑具有重要的作用。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展,佐劑的研發(fā)也得到了極大地促進,新型佐劑層出不窮,例如CpG二寡聚核苷酸(CpG oligodeoxynucleotides,CpG ODN)佐劑,免疫刺激復(fù)合物(Immunostimulating complex,ISCOM)佐劑,納米佐劑以及Toll樣受體(Toll-like receptors, TLR)依賴型佐劑相繼出現(xiàn)。盡管佐劑的種類繁多,但目前被批準用于臨床使用的仍然很少,且認證使用的包括鋁佐劑在內(nèi)的佐劑在使用中仍然具有著局限性,例如無法有效的增強細胞免疫、引起局部刺激癥狀等不良反應(yīng)。因此,開發(fā)安全性高、對體液免疫和細胞免疫均有較好增強作用的新型疫苗佐劑具有重要的意義。低分子量肝素鈉(Low molecular weight heparin sodium,LMWH-Na)和帕米膦酸(Pamidronic acid,PAD)是臨床上分別作為抗凝血劑和治療骨疾病的兩種藥物,LMWH-Na屬于糖胺聚糖(Glycosaminoglycan,GAG)家族中肝素類物質(zhì),PAD屬于雙膦酸鹽物質(zhì)。近年來,研究人員發(fā)現(xiàn)肝素類物質(zhì)和雙膦酸鹽具有多種生物功能,例如免疫調(diào)節(jié)作用和抗腫瘤作用,尤其是兩者的免疫調(diào)節(jié)作用受到許多研究人員的青睞,并且在機制研究上也取得了一定的成果。另外,LMWH-Na和PAD結(jié)構(gòu)成分明確,易于生產(chǎn)、保存和運輸,且作為臨床藥物具有一定的安全性,因此,具有作為佐劑的潛力。基于肝素類藥物以及雙膦酸鹽的免疫調(diào)節(jié)作用,本實驗旨在初步探討LMWH-Na和PAD作為佐劑對甲型肝炎病毒(Hepatitis A virus,HAV)疫苗誘導(dǎo)小鼠體液免疫應(yīng)答的影響。實驗中將甲型肝炎減毒活疫苗HepA-1(18 EU)與5種不同劑量的LMWH-Na以及4種不同劑量的PAD分別混合作為實驗組,并取生理鹽水作為陰性對照組、HepA-1(18 EU)作為陽性對照組、HepA-1混合Al (OH) 3 (300μg)作為鋁佐劑對照組,于0周經(jīng)背部皮下注射,共免疫一次,并在免疫后第4、8、12、16周進行尾靜脈采血,采用ELISA法檢測小鼠血清中抗-HAV抗原特異性IgG抗體水平。在實驗期間,對小鼠的健康狀況進行觀察,并于實驗結(jié)束時,取陰性對照組以及LMWH-Na和PAD最大劑量組小鼠心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟各主要器官制作病理切片進行對比觀察。實驗結(jié)果表明,LMWH-Na具有一定的佐劑效應(yīng),其佐劑效應(yīng)隨著時間的延長而增加,至第8周達到高峰,LMWH-Na的佐劑效應(yīng)并不是隨著注射劑量的升高而增加,而是在10 μL/只時具有最佳效果,但其佐劑效應(yīng)不如鋁佐劑。PAD的佐劑效果不佳,PAD各劑量組實驗小鼠的抗-HAV IgG水平在所測各時間點較陽性對照組沒有大幅度增高,表明實驗組小鼠使用PAD作為免疫佐劑后體液免疫效應(yīng)未有顯著增強。分析認為,雖然實驗結(jié)果顯示PAD的佐劑效應(yīng)不佳,但這并不意味著其不具有佐劑效應(yīng),而可能是由于實驗小鼠的鼠齡較小,體內(nèi)免疫系統(tǒng)的發(fā)育并沒有完全成熟造成的,也可能是由于所選擇的PAD劑量不合適,從而不能完全發(fā)揮增強體液免疫的作用。下一步實驗將從這兩方面入手,探討PAD作為佐劑的可能性。在佐劑的安全性試驗中,實驗期間小鼠未出現(xiàn)蜷縮、豎毛、搔鼻、抽搐等明顯異常,陰性對照組和LMWH-Na實驗組小鼠心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟組織病理分析均未觀察到明顯病變。陰性對照組和PAD實驗組小鼠心臟、肝臟、脾臟、肺臟組織病理分析均未觀察到明顯病變,表明LMWH-Na和PAD安全性良好。
【關(guān)鍵詞】：低分子量肝素鈉 帕米膦酸 佐劑 甲肝疫苗 體液免疫
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R392
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-8
• 前言8-19
• 一、疫苗佐劑概況8-9
• 二、研究新型疫苗的必要性9-10
• 三、低分子量肝素鈉10-14
• (一) 低分子量肝素鈉的特征10-11
• (二) 肝素的抗病毒作用11-12
• (三) 肝素具有抗癌作用12
• (四) 肝素調(diào)節(jié)免疫的作用12-14
• 四、帕米膦酸14-19
• (一) 雙膦酸鹽家族以及帕米膦酸14-15
• (二) 雙膦酸鹽增強免疫的作用15-16
• (三) 雙膦酸鹽的抗腫瘤作用16-19
• 第一部分 低分子量肝素鈉佐劑對甲型肝炎病毒疫苗誘導(dǎo)小鼠體液免疫應(yīng)答的影響19-30
• 一、材料與方法19-24
• (一) 材料19-20
• (二) 實驗方法20-24
• 二、實驗數(shù)據(jù)的處理以及分析24-28
• (一) 實驗數(shù)據(jù)處理24-25
• (二) 實驗結(jié)果分析25-26
• (三) 病理學(xué)分析26-28
• 三、討論28-29
• 四、小結(jié)29-30
• 第二部分 帕米膦酸作為佐劑對甲型肝炎病毒疫苗誘導(dǎo)小鼠體液免疫應(yīng)答的影響30-41
• 一、材料和方法30-35
• (一) 材料30-31
• (二) 實驗方法31-35
• 二、實驗數(shù)據(jù)的處理以及分析35-39
• (一) 實驗數(shù)據(jù)處理35-36
• (二) 實驗結(jié)果分析36-37
• (三) 病理學(xué)分析37-39
• 三、討論39-40
• 四、小結(jié)40-41
• 參考文獻41-45
• 附錄45-47
• 致謝47-48
• 個人簡歷48-49

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