本文關鍵詞：腦膜炎球菌表面蛋白fHBP與PorA的融合表達及其免疫原性

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【摘要】：目的構建腦膜炎球菌(Neisseria meningitidis,Nm)表面蛋白fHBP重組表達質粒,并與PorA蛋白融合表達,對單抗原fHBP和融合抗原fHBP-PorA的免疫原性進行檢測。方法篩選并優(yōu)化fHBP和PorA基因序列,設計連接片段將PorA連接至fHBPC-端,構建重組表達質粒pET-24b-fHBP和pET-24b-fHBP-PorA,分別轉化E.coli BL21(DE3)感受態(tài)細胞,IPTG誘導表達。表達的重組蛋白經(jīng)鎳柱親和層析和凝膠過濾層析后免疫家兔,制備抗血清,采用間接ELISA、流式細胞術和微量血清殺菌力試驗(serum bactericidal assay,SBA)評價抗原的免疫原性。結果經(jīng)雙酶切和測序鑒定,兩個蛋白的重組表達質粒構建正確。重組蛋白fHBP以可溶形式表達,fHBP-PorA以包涵體形式表達,純化后純度均在90%以上。抗血清滴度均在1.0×10~5以上。流式細胞術檢測顯示,抗血清與Nm可發(fā)生特異性結合,且fHBP-Por A抗血清顯示出一定的交叉反應。fHBP和fHBP-PorA抗血清對Nm29019的殺菌滴度為1∶128。結論 fHBP具有較好的抗原性和免疫原性,具備B群腦膜炎疫苗開發(fā)前景。多抗原融合策略需更多的優(yōu)化考慮。
【作者單位】： 上海生物制品研究所有限責任公司第三研究室;
【關鍵詞】： 腦膜炎球菌 fHBP蛋白 PorA蛋白 融合表達 免疫原性
【分類號】：R378.15
【正文快照】： 腦膜炎球菌(Neisseria meningitidis,Nm)感染可導致流行性腦脊髓膜炎和敗血癥。莢膜多糖及多糖結合疫苗能有效控制A、C、W135和Y群Nm感染,而對B群Nm(Men B)感染的預防,只有外膜囊泡疫苗(outer membrane vesicle,OMV)在局部地區(qū)獲得成功[1]。OMV疫苗的主要保護性抗原組分是I類

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