本文關(guān)鍵詞：人類(lèi)誘導(dǎo)多能干細(xì)胞的培養(yǎng)、鑒定及其攜帶的多能性基因-Oct4、Nanog、Lin28和Fgf4表達(dá)水平的檢測(cè)，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:觀察人類(lèi)誘導(dǎo)多能干細(xì)胞在體外的培養(yǎng)情況與生物學(xué)特性,并檢測(cè)其相關(guān)多能性基因的表達(dá)水平,為后期定向誘導(dǎo)人類(lèi)誘導(dǎo)多能干細(xì)胞向表皮樣干細(xì)胞分化奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ),也為其能夠成為組織工程種子細(xì)胞新來(lái)源提供了可能性。方法:將人類(lèi)誘導(dǎo)多能干細(xì)胞接種在經(jīng)過(guò)輻照處理的CF-01小鼠的胚胎成纖維細(xì)胞(feeder細(xì)胞)上,加入人類(lèi)胚胎干細(xì)胞完全培養(yǎng)基(含bFGF)培養(yǎng)細(xì)胞。將此時(shí)的人類(lèi)誘導(dǎo)多能干細(xì)胞分為A1和A2兩組,A1組細(xì)胞直接進(jìn)行堿性磷酸酶染色檢測(cè),并使用TRIzon裂解液裂解細(xì)胞,提取該組細(xì)胞的總RNA,進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)其相關(guān)多能性基因的表達(dá)水平;A2組細(xì)胞則采用Ⅳ型膠原酶消化法傳代,倒置相差顯微鏡下觀察誘導(dǎo)多能干細(xì)胞傳代后的生長(zhǎng)情況和細(xì)胞形態(tài)。傳代至第15代時(shí),A2組細(xì)胞同樣進(jìn)行堿性磷酸酶染色檢測(cè)和實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)相關(guān)多能性基因的表達(dá)水平。結(jié)果:本實(shí)驗(yàn)中培養(yǎng)的人類(lèi)誘導(dǎo)多能干細(xì)胞生長(zhǎng)情況良好,表現(xiàn)出經(jīng)典的干細(xì)胞克隆樣生長(zhǎng),邊界清晰,增殖旺盛;A1和A2兩組細(xì)胞在堿性磷酸酶染色檢測(cè)中均呈現(xiàn)陽(yáng)性表現(xiàn);A1和A2兩組細(xì)胞進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)相關(guān)多能性基因結(jié)果顯示:A1和A2兩組中4種基因的相對(duì)表達(dá)量沒(méi)有明顯差異,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P〉0.05)。結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)中培養(yǎng)的人類(lèi)誘導(dǎo)多能干細(xì)胞可以穩(wěn)定生長(zhǎng)并旺盛增殖,在生物學(xué)特性方面也同人類(lèi)胚胎干細(xì)胞相類(lèi)似。隨著人類(lèi)誘導(dǎo)多能干細(xì)胞傳遞代數(shù)的增加,它所表達(dá)的相關(guān)多能性基因的水平仍與最初的人類(lèi)誘導(dǎo)多能干細(xì)胞的表達(dá)水平相接近,并不會(huì)因此而出現(xiàn)下調(diào)。這為后期本課題組進(jìn)一步誘導(dǎo)人類(lèi)誘導(dǎo)多能干細(xì)胞定向分化為表皮樣干細(xì)胞提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ),也表明了人類(lèi)誘導(dǎo)多能干細(xì)胞作為種子細(xì)胞新來(lái)源的潛力。
【關(guān)鍵詞】：胚胎干細(xì)胞 誘導(dǎo)多能干細(xì)胞 分化 多能性基因 實(shí)時(shí)定量PCR
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R329.2
【目錄】：

• 摘要3-4
• ABSTRACT4-8
• 中英文縮略詞表8-9
• 第1章 引言9-11
• 第2章 材料和方法11-19
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料11
• 2.1.1 組織標(biāo)本11
• 2.2 主要儀器和試劑11-12
• 2.2.1 主要儀器11
• 2.2.2 主要試劑11-12
• 2.2.3 主要溶液的配置及保存12
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法12-18
• 2.3.1 實(shí)驗(yàn)分組12
• 2.3.2 飼養(yǎng)層（feeder）的制備12-13
• 2.3.3 人類(lèi)誘導(dǎo)多能干細(xì)胞的培養(yǎng)13-14
• 2.3.4 人類(lèi)誘導(dǎo)多能干細(xì)胞的鑒定14-15
• 2.3.5 采用Real-Time Quantitative PCR技術(shù)檢測(cè)人類(lèi)誘導(dǎo)多能干細(xì)胞中多能性基因的表達(dá)水平15-18
• 2.4 統(tǒng)計(jì)分析18-19
• 第3章 結(jié)果19-24
• 3.1 細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察19-22
• 3.1.1 復(fù)蘇后MEF生長(zhǎng)情況19-20
• 3.1.2 人類(lèi)誘導(dǎo)多能干細(xì)胞生長(zhǎng)情況20-22
• 3.2 堿性磷酸酶染色（AP染色）結(jié)果22-23
• 3.3 應(yīng)用Real-Time Quantitative PCR檢測(cè)兩組細(xì)胞多能性基因表達(dá)水平23-24
• 第4章 討論24-31
• 第5章 結(jié)論31-32
• 致謝32-33
• 參考文獻(xiàn)33-37
• 攻讀學(xué)位期間獲得的研究成果37-38
• 綜述 誘導(dǎo)多能干細(xì)胞的研究現(xiàn)狀及其面臨的問(wèn)題38-48
• 參考文獻(xiàn)45-48

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本文編號(hào)：464109