本文關(guān)鍵詞：白喉毒素?zé)o毒突變體H21G蛋白的分泌性表達(dá)及純化，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的原核分泌性表達(dá)白喉毒素?zé)o毒突變體H21G蛋白并進(jìn)行純化,為下一步開發(fā)以重組H21G蛋白為基礎(chǔ)的疫苗奠定基礎(chǔ)。方法以p ET16a-H21G質(zhì)粒為模板,PCR擴(kuò)增H21G基因,亞克隆至p ET22b載體中,構(gòu)建重組原核表達(dá)質(zhì)粒p ET22b-H21G,轉(zhuǎn)化感受態(tài)大腸埃希菌BL21(DE3),IPTG誘導(dǎo)重組H21G蛋白分泌性表達(dá)。重組蛋白經(jīng)滲透壓休克,DEAE Sepharose Fast Flow陰離子交換層析和Phenyl Sepharose 6FF(high sub)疏水層析純化后,使用還原/非還原SDS-PAGE和HPLC法分析純化蛋白的純度,窄范圍等電聚焦分析其等電點(diǎn),MALDI-TOF質(zhì)譜法分析其相對(duì)分子質(zhì)量,N-末端測(cè)序法鑒定N-末端氨基酸序列。結(jié)果重組原核分泌性表達(dá)質(zhì)粒p ET22b-H21G經(jīng)雙酶切(NcoⅠ和XhoⅠ)和測(cè)序證明構(gòu)建正確;目標(biāo)蛋白以可溶形式存在于宿主菌周質(zhì)間隙,表達(dá)量為10%~15%;經(jīng)純化后,重組蛋白純度達(dá)95%以上,等電點(diǎn)在4.55~6.20之間,相對(duì)分子質(zhì)量和N-末端氨基酸序列均與白喉毒素相符合。結(jié)論成功分泌性表達(dá)并純化了重組白喉毒素?zé)o毒突變體H21G蛋白,為下一步開發(fā)以重組H21G蛋白為基礎(chǔ)的疫苗奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 蘭州生物制品研究所有限責(zé)任公司甘肅省疫苗工程技術(shù)研究中心;中國生物技術(shù)股份有限公司;
【關(guān)鍵詞】： 白喉毒素 無毒突變體HG 分泌性表達(dá) 純化
【分類號(hào)】：R378
【正文快照】： 白喉毒素(diphtheria toxin,DTx)為白喉?xiàng)U菌(Cor-ynebacterium diphtheriae)被β噬菌體溶源化后,由β噬菌體上序列長度為1 605 bp的tox基因編碼合成的外毒素[1]。DTx由535個(gè)氨基酸組成,相對(duì)分子質(zhì)量58 300,可分為3個(gè)結(jié)構(gòu)區(qū):N-端為催化區(qū),中間為穿膜區(qū),C-端為受體結(jié)合區(qū),3個(gè)區(qū)

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本文編號(hào)：453221