本文關(guān)鍵詞：EV71多表位抗原親和純化及類病毒顆粒胞外自組裝，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：利用腸道病毒71型(EV71)衣殼蛋白優(yōu)勢(shì)表位肽段構(gòu)建融合蛋白抗原能有效抑制病毒感染,有望成為繼滅活病毒后更為安全有效的疫苗品種。該融合蛋白能通過原核體系有效表達(dá)但形成無序包涵體,采用常規(guī)層析介質(zhì)難以實(shí)現(xiàn)目標(biāo)蛋白與宿主雜質(zhì)的有效分離,阻礙了對(duì)該抗原蛋白進(jìn)行全面臨床前活性及安全性評(píng)價(jià)。在原有融合蛋白抗原N端插入組氨酸標(biāo)簽,對(duì)形成的包涵體變性溶解后直接采用鎳金屬螯合親和介質(zhì)進(jìn)行分離純化,獲得了純度大于95%的抗原純品,目標(biāo)蛋白收率46.8%。采用透析方式脫除純化樣品中高濃度脲,發(fā)現(xiàn)直接透析至無脲的緩沖液中蛋白質(zhì)大量沉淀,而先稀釋至2mol/L脲的緩沖液中然后用G25脫鹽柱完全脫除脲則無任何沉淀形成,獲得近100%的蛋白質(zhì)收率。透射電鏡分析最終樣品發(fā)現(xiàn)融合蛋白形成了10nm左右粒徑均一的類病毒蛋白顆粒,且在p H 8.0的磷酸鹽緩沖液中保持穩(wěn)定。該研究結(jié)果為將EV71融合蛋白抗原發(fā)展為安全有效且低成本的手足口疫苗奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 中國(guó)科學(xué)院過程工程研究所生化工程國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;中國(guó)科學(xué)院大學(xué);中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所;
【關(guān)鍵詞】： 腸道病毒型 手足口病疫苗 多表位融合抗原 親和層析 復(fù)性及自組裝
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(21576267) 北京市自然科學(xué)基金(2162041) “重大新藥創(chuàng)制”國(guó)家科技重大專項(xiàng)(2012ZX09101319004,2016ZX09101120-006)資助項(xiàng)目
【分類號(hào)】：R392
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  本文關(guān)鍵詞：EV71多表位抗原親和純化及類病毒顆粒胞外自組裝，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：422981