本文關(guān)鍵詞：CORMs對X射線輻照后斑馬魚胚胎發(fā)育的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:采用斑馬魚動物模型研究一氧化碳釋放分子(CORM-3)對X射線輻照后斑馬魚胚胎發(fā)育的作用,并初步探討CORM-3的作用機(jī)制。材料和方法:用不同濃度的CORM-3溶液(0、6.25、12.5、25、50、100、200、400μmol/L)處理受精后4h(4hpf)的發(fā)育正常的斑馬魚胚胎并培養(yǎng)至144hpf,分別在不同的時(shí)間點(diǎn)觀察并記錄CORM-3對斑馬魚胚胎的死亡率、孵化率、畸形、胎動、心率、體長及其游泳行為等發(fā)育的影響。用10μmol/L的CORM-3預(yù)處理發(fā)育正常的4hpf胚胎1h后給予4GyX射線照射,觀察CORM-3對X射線輻照后斑馬魚的死亡率、孵化率、畸形率、胎動及游泳行為等發(fā)育的影響;采用DCFH-DA熒光探針、SOD試劑盒分別檢測24hpf胚胎體內(nèi)的活性氧水平及SOD活性;采用吖啶橙(AO)染色,流式細(xì)胞分析(FCM)檢測24hpf斑馬魚胚胎體內(nèi)凋亡細(xì)胞;采用實(shí)時(shí)熒光定量分析(RT-PCR)檢測斑馬魚胚胎凋亡相關(guān)基因表達(dá)以及蛋白免疫印跡(WB)檢測斑馬魚胚胎體內(nèi)蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:(1)CORM-3對斑馬魚胚胎發(fā)育的影響:隨著CORM-3濃度的增加,斑馬魚胚胎的死亡率逐漸增加,胎動、心率、體長逐漸降低;濃度為50μmol/L的CORM-3處理組開始可明顯抑制胚胎孵化,致使胚胎孵化率降低(P0.05);CORM-3濃度高于100μmol/L可導(dǎo)致斑馬魚幼魚形態(tài)畸形,主要為心包水腫及卵黃囊水腫。在可見光實(shí)驗(yàn)中,CORM-3處理組的幼魚游泳總距離隨著濃度的增加逐漸降低,200和400μmol/L處理組幼魚運(yùn)動遲緩(P0.05)。(2)CORM-3對X射線輻照后斑馬魚胚胎發(fā)育的影響:X射線輻照可導(dǎo)致斑馬魚胚胎的死亡率及畸形率的增加,孵化率、胎動及游泳總距離降低(P0.05);CORM-3預(yù)處理可降低X射線對斑馬魚胚胎發(fā)育的影響,表現(xiàn)為死亡率及畸形率低于X射線輻照組,孵化率、胎動及游泳總距離高于X射線輻照組(P0.05)。(3)CORM-3對X射線輻照后的斑馬魚胚胎體內(nèi)活性氧水平以及SOD活性的影響:24 hpf時(shí),X射線輻照組斑馬魚胚胎體內(nèi)活性氧水平明顯升高,SOD活性顯著降低(P0.001);CORM-3預(yù)處理進(jìn)升高SOD活性,降低ROS水平(P0.001),緩解X射線誘導(dǎo)產(chǎn)生的斑馬魚胚胎體內(nèi)活性氧的蓄積。(4)CORM-3對X射線照射后的斑馬魚胚胎凋亡、凋亡相關(guān)基因以及蛋白水平的影響:AO染色及流式細(xì)胞分析顯示X射線輻照組斑馬魚胚胎的早期凋亡細(xì)胞較對照組多,CORM-3預(yù)處理可降低X射線引起的細(xì)胞凋亡;RT-PCR顯示X射線輻照組的促凋亡基因Bax、Caspase9、Caspase3的表達(dá)量高于對照組(P0.05),抗凋亡基因Bcl2的表達(dá)量低于對照組;CORM-3預(yù)處理可改善X射線對胚胎損傷導(dǎo)致的凋亡相關(guān)基因的表達(dá),下調(diào)Bax、Caspase9、Caspase3的表達(dá),上調(diào)抗凋亡相關(guān)基因Bcl2的表達(dá);Western blot結(jié)果顯示CORM-3預(yù)處理可緩解X射線對斑馬魚胚胎導(dǎo)致的DNA損傷,γ-H2AX,P53蛋白表達(dá)量下降,Bcl2表達(dá)量升高。結(jié)論:1)CORM-3≥50μmol/L時(shí)對斑馬魚發(fā)育具有毒性作用;10μmol/L的CORM-3對X射線輻照后的斑馬魚的發(fā)育具有潛在的保護(hù)作用。2)10μmol/L的CORM-3促進(jìn)SOD活性水平升高,降低胚胎體內(nèi)的活性氧水平,通過抗氧化應(yīng)激反應(yīng)來保護(hù)X射線對斑馬魚胚胎的輻射損傷。3)10μmol/L的CORM-3通過調(diào)節(jié)凋亡相關(guān)基因的表達(dá)發(fā)揮抗凋亡作用以及促進(jìn)DNA損傷的修復(fù)來保護(hù)X射線對斑馬魚胚胎的輻射損傷。
【關(guān)鍵詞】：一氧化碳釋放分子 斑馬魚胚胎 發(fā)育毒性 X射線
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R-332;R818
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• ABSTRACT5-8
• 縮略詞表8-11
• 第一章 緒論11-17
• 1.1 一氧化碳釋放分子（CORMS）的研究現(xiàn)狀11-14
• 1.1.1 CORMs的起源11
• 1.1.2 CORMs的性質(zhì)11-13
• 1.1.3 CORMs的生物相容性研究現(xiàn)狀13-14
• 1.2 斑馬魚在藥物篩選中的應(yīng)用現(xiàn)狀14
• 1.3 斑馬魚在輻射生物學(xué)中的應(yīng)用現(xiàn)狀14-15
• 1.4 選題依據(jù)15-17
• 第二章 CORM-3 對斑馬魚胚胎發(fā)育的影響17-25
• 2.1 引言17
• 2.2 實(shí)驗(yàn)材料與方法17-18
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法18-19
• 2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果19-22
• 2.5 討論22-25
• 第三章 CORM-3 對X射線輻照后斑馬魚胚胎發(fā)育的作用25-30
• 3.1 引言25
• 3.2 實(shí)驗(yàn)材料25-26
• 3.3 實(shí)驗(yàn)方法26
• 3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果26-28
• 3.5 討論28-30
• 第四章 CORM-3 對X射線輻照后斑馬魚體內(nèi)ROS的影響30-35
• 4.1 引言30
• 4.2 實(shí)驗(yàn)材料30-31
• 4.3 實(shí)驗(yàn)方法31
• 4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果31-33
• 4.5 討論33-35
• 第五章 CORM-3 對X射線輻照后斑馬魚胚胎凋亡的影響35-43
• 5.1 引言35
• 5.2 實(shí)驗(yàn)材料35-36
• 5.3 實(shí)驗(yàn)方法36-39
• 5.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果39-41
• 5.5 討論41-43
• 第六章 全文總結(jié)43-44
• 參考文獻(xiàn)44-50
• 在學(xué)期間的研究成果50-51
• 致謝51

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1 薛宏亮;張乃元;袁占鵬;;斑馬魚在神經(jīng)毒理學(xué)研究中的應(yīng)用[J];公共衛(wèi)生與預(yù)防醫(yī)學(xué);2014年02期

2 ;學(xué)科前瞻[J];當(dāng)代醫(yī)學(xué);2003年12期

3 張立鳳;鐘濤;桂永浩;;外源性視黃酸對斑馬魚心血管系統(tǒng)發(fā)育的影響[J];中國實(shí)驗(yàn)動物學(xué)報(bào);2006年02期

4 楊寒朔;湯明海;鄧洪新;楊金亮;;納升超高效液相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜檢測斑馬魚胚胎中小分子多肽的初步研究[J];四川大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2007年06期

5 徐娟;吳南翔;;斑馬魚在環(huán)境內(nèi)分泌干擾物篩選和檢測中的應(yīng)用[J];國外醫(yī)學(xué)(衛(wèi)生學(xué)分冊);2009年04期

6 胡瑋;程露陽;宋韞韜;夏鴻飛;孫大光;李鵬;李丹;陸彩玲;馬旭;;硫代硫酸鈉干擾斑馬魚胚胎發(fā)育并致畸[J];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào);2009年09期

7 何秋霞;劉可春;楚杰;王思鋒;韓利文;王希敏;;斑馬魚作為模式生物在心血管疾病研究中的應(yīng)用[J];生命的化學(xué);2009年05期

8 孫淑娜;桂永浩;蔣t

本文編號：407489