本文關(guān)鍵詞：KSHV K15P慢病毒載體的構(gòu)建及其滴度測(cè)定，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的構(gòu)建含卡波肉瘤相關(guān)皰疹病毒(KSHV)ORF K15P基因的慢病毒載體,并對(duì)其在293T細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)進(jìn)行研究。方法 PCR法擴(kuò)增獲得KSHV K15P基因,限制性?xún)?nèi)切酶Nhe I酶切和無(wú)縫克隆法構(gòu)建重組慢病毒載體p CDHCMV-K15P-GFP,通過(guò)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑將重組慢病毒載體與3種輔助質(zhì)粒p MDL-PRRE、pRSV-Rev和p MD2.g共轉(zhuǎn)染HEK 293T細(xì)胞包裝產(chǎn)生慢病毒,Western blot法檢測(cè)K15P蛋白的表達(dá)。結(jié)果經(jīng)酶切及測(cè)序鑒定,成功構(gòu)建慢病毒載體,重組慢病毒質(zhì)粒與輔助質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染HEK 293T細(xì)胞可見(jiàn)有熒光表達(dá),說(shuō)明K15P基因在細(xì)胞內(nèi)有表達(dá)并且96 h后產(chǎn)生4×106TU/ml滴度為慢病毒。結(jié)論成功構(gòu)建了KSHV K15P慢病毒表達(dá)載體p CDH-CMV-K15P-GFP,獲得高效表達(dá)K15P基因的慢病毒顆粒,為后續(xù)其在細(xì)胞內(nèi)的功能研究奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
【作者單位】： 安徽醫(yī)科大學(xué)微生物學(xué)教研室;合肥市第三人民醫(yī)院檢驗(yàn)科;
【關(guān)鍵詞】： 卡波肉瘤相關(guān)皰疹病毒 KP基因 慢病毒
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(編號(hào):81271837) 安徽省高校省級(jí)科學(xué)研究項(xiàng)目(編號(hào):KJ2012A161) 安徽醫(yī)科大學(xué)博士科研經(jīng)費(fèi)資助項(xiàng)目(編號(hào):XJ200914)
【分類(lèi)號(hào)】：R373
【正文快照】： 2016-06-02接收卡波肉瘤相關(guān)皰疹病毒(Kaposi sarcoma-associ-ated herpesvirus,KSHV),又被稱(chēng)為人類(lèi)皰疹病毒8型(human herpesvirus 8,HHV-8),屬于γ皰疹病毒亞科。華裔科學(xué)家Chang et al[1]于1994年在卡波肉瘤(Kaposi's sacoma,KS)組織中發(fā)現(xiàn)該病毒,其除了是引起KS的病原體,

【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：406660