發(fā)布時間：2017-05-27 18:08

  本文關鍵詞：混合培養(yǎng)體系中間充質(zhì)干細胞與造血干細胞生物學特性，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：為了體外同時獲得符合鑒定標準的造血干/祖細胞(hematopoietic stem/progenitor cell,HSC/HPC)和間充質(zhì)干細胞(mesenchymal stem cell,MSC),本研究采用Ficoll淋巴細胞分離液方法從臍帶血中分離出臍帶血單個核細胞,MACS免疫磁珠法分離出CD34~+的造血干細胞。分離出的細胞與MSC同時接種在培養(yǎng)瓶中,利用15%AB型臍血漿的IMDM培養(yǎng)基添加白細胞介素3(interleukin-3,IL-3)、IL-6、血小板生成素(thrombopoietin,TPO)、干細胞因子(stem cell factor,SCF)和Flt-3配體(FMSlike tyrosine kinase 3 ligand,Flt-3L)因子培養(yǎng)體系來同時培養(yǎng)擴增HSC/HPC和MSC。為了評估擴增出的HSC/HPC和MSC是否符合細胞鑒定標準,本研究通過倒置顯微鏡觀察HSC/HPC和MSC生長狀態(tài),并計數(shù)細胞。流式細胞儀檢測HSC/HPC表面抗原CD34陽性百分率,檢測第4代(P4)MSC表面抗原CD105、CD90、CD73、CD45、CD34和HLA-DR陽性表達率。半固體集落培養(yǎng)檢測HSC/HPC的粒細胞-巨噬細胞集落形成能力。將共培養(yǎng)至P4的MSC行成骨、成軟骨、成脂肪誘導鑒定。通過秋水仙素法進行MSC核型分析。結(jié)果顯示,體外共培養(yǎng)的HSC/HPC依然有高增殖能力、集落形成能力和CD34陽性百分率。MSC具有向成骨細胞、脂肪細胞和軟骨細胞誘導分化的能力。MSC染色體核型維持穩(wěn)定。以上結(jié)果提示本研究成功建立了一種合適的MSC和HSC/HPC混合培養(yǎng)體系,通過該體系可同時獲得兩種干細胞,共培養(yǎng)后的MSC依然有典型的MSC的生物學功能;共培養(yǎng)后的HSC/HPC的粒細胞-巨噬細胞集落培養(yǎng)、細胞數(shù)量和流式表型符合鑒定標準,HSC/HPC生物學功能沒有受到影響。
【作者單位】： 廣東省臍帶血造血干細胞庫;
【關鍵詞】： 造血干/祖細胞 間充質(zhì)干細胞 共培養(yǎng)
【分類號】：R329.2
【正文快照】： 造血干細胞(hematopoietic stem cell,HSC)是血液成分之一,是生成各種血細胞的最起始細胞,又稱造血多能干細胞,存在于骨髓、胚胎肝、外周血及臍帶血中。它既具有高度自我更新能力,又具有進一步分化為血液系統(tǒng)祖細胞的能力。目前在臨床上,HSC已經(jīng)得到了廣泛的應用。造血干細胞

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本文編號：400769