目的構建人TBC1D10C(hTBC1D10C)基因過表達慢病毒載體,并對其進行功能鑒定。方法利用PCR技術擴增hTBC1D10C基因片段,構建pLVX-hTBC1D10C-mCMVZsGreen-PGK-Puro過表達載體質粒,將構建的過表達載體質粒和系統(tǒng)包裝質粒應用高效轉染試劑盒轉染至293T細胞,以包裝rLV-hTBC1D10C-zpp,在HEK293細胞中檢測病毒滴度。rLV-hTBC1D10C-zpp感染H9C2心肌細胞,蛋白免疫印跡法檢測hTBC1D10C蛋白表達。結果 pLVX-hTBC1D10C-mCMV-ZsGreen-PGK-Puro過表達質粒構建成功,rLV-hTBC1D10C-zpp包裝順利,滴度為1×10⁸ TU/ml,感染H9C2心肌細胞后,hTBC1D10C蛋白表達上調(diào)(P <0.05)。結論 rLV-hTBC1D10C-zpp構建成功,在心肌細胞中具有高效表達hTBC1D10C的效應。

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【文章目錄】：
材料與方法
    一、材料
        1. 材料
        2. 主要試劑及儀器
        3. 引物設計及合成
    二、方法
        1.pLVX-h TBC1D10C-m CMV-Zs Green-PGK-Puro載體的構建
        2. rLV-hTBC1D10C-zpp慢病毒的包裝、收集、擴增及滴度測定
        3. rLV-hTBC1D10C-zpp功能鑒定
    三、統(tǒng)計學處理
結果
    一、pLVX-hTBC1D10C-mCMV-ZsGreen-PGK-Puro載體的構建
    二、rLV-hTBC1D10C-zpp慢病毒的包裝、收集、擴增及滴度測定
    三、rLV-hTBC1D10C-zpp功能鑒定
討論



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