發(fā)布時間：2024-03-07 02:43

　　目的:探討不同厚度莢膜的鮑曼不動桿菌誘導鼠Raw 264. 7巨噬細胞自噬和凋亡的能力及潛在的機制。方法:從肺炎患者痰液中分離鑒定鮑曼不動桿菌,以剛果紅染色法染色細菌莢膜并篩選莢膜厚度顯著不同的菌株用于后續(xù)研究。分別以厚莢膜株(Ab-H株)和薄莢膜株(Ab-B株)感染Raw 264. 7細胞,于感染后1 h、3 h和6 h時收集細胞,采用免疫印跡法檢測細胞自噬相關蛋白LC-3和Beclin-1表達,以及PI3K、Akt和mTOR磷酸化水平,采用流式細胞術檢測細胞活性氧生成量和凋亡率。結果:鮑曼不動桿菌經(jīng)剛果紅染色后,菌體染成紫黑色,背景染成紅色,莢膜不著色,可以清晰地觀察到細菌莢膜厚度。篩選出兩株莢膜厚度差異顯著的鮑曼不動桿菌,分別為AbH株和Ab-B株。上述菌株感染Raw 264. 7細胞后均可以誘導細胞自噬和凋亡,并增加細胞活性氧生成量,PI3K、Akt和mTOR的磷酸化水平受到顯著抑制,且抑制作用隨著時間延長而增加(P <0. 05)。Ab-H株細胞凋亡率、自噬相關蛋白Becline-1表達量和活性氧生成量顯著高于Ab-B株(P <0. 05)。結論:鮑曼不動桿菌能夠...

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【部分圖文】：

圖5各組Raw264.7細胞PI3K、Akt和mTOR蛋白磷酸化水平檢測

圖4各組Raw264.7細胞活性氧生成量比較(DCFH-DA熒光探針法)3討論

圖4各組Raw264.7細胞活性氧生成量比較(DCFH-DA熒光探針法)

兩株不同莢膜厚度鮑曼不動桿菌感染Raw264.7細胞后，細胞PI3K、Akt和mTOR的磷酸化水平顯著受到抑制，且抑制作用隨著時間延長而增強(P<0.05)。以Ab-H株作用Raw264.7細胞1h和3h時，細胞PI3K磷酸化水平顯著低于Ab-B株作用(1h,t=3.2....

圖3各組Raw264.7細胞凋亡率比較(AnnexinV-FITC/PI法)

圖2各組Raw264.7細胞自噬相關蛋白LC3和Beclin-1表達比較2.3不同莢膜厚度鮑曼不動桿菌誘導Raw264.7細胞活性氧生成增加

圖2各組Raw264.7細胞自噬相關蛋白LC3和Beclin-1表達比較

Ab-H株和Ab-B株均可誘導Raw264.7細胞不同程度的自噬和凋亡(圖2和圖3)。Raw264.7細胞自噬相關蛋白LC-3Ⅱ在感染后1h時未被檢出，但隨感染時間延長其表達量在各組細胞均增加。感染后3h和6h時，Ab-B組和Ab-H組細胞LC-3Ⅱ表達量顯著高于對照組....

本文編號：3921267