剛地弓形蟲是一種專性細胞內寄生原蟲,在人和家畜等中間宿主體內可引發(fā)普遍的人畜共患弓形蟲病。據(jù)報道,全球有多達20-30%的人感染弓形蟲,且感染后沒有有效的藥物可以根治�？紤]到目前還沒有可使用的弓形蟲疫苗,同時化學藥物治療將會給人體帶來許多的副作用,故研制一種安全有效的弓形蟲疫苗對控制人類和動物的弓形蟲感染具有十分重要的意義。基于弓形蟲MAPK1抗原良好的免疫原性和免疫反應性,本次研究我們選用了弓形蟲MAPK1基因構建DNA疫苗。目的:構建弓形蟲MAPK1抗原的真核表達質粒,制備弓形蟲MAPK1的DNA疫苗,評價該疫苗所產生的免疫保護效應,同時也進一步探索MAPK1蛋白作為弓形蟲疫苗候選抗原的可能性。方法:提取弓形蟲RH株的RNA,通過RT-PCR技術逆轉錄形成cDNA,以cDNA作為PCR模板擴增出TgMAPK1基因。TgMAPK1基因的膠回收片段與TA克隆載體pEASY-T1連接構建重組質粒,之后進行PCR、雙酶切鑒定并膠回收TgMAPK1基因片段。將上述膠回收產物與真核表達載體pEGFP-C1連接構建重組質粒pEGFP-MAPK1并進行PCR、雙酶切及測序鑒定。重組質粒轉染真核細胞...

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１?ＰＣＲ產物鑒定結果??Ｍ：?ＤＮＡ標記物；１：擴增的ＭＡＰＫ１基

圖１?ＰＣＲ產物鑒定結果??Ｍ：?ＤＮＡ標記物；１：擴增的ＭＡＰＫ１基Ｆｉｇ．?１?Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔ??Ｍ：?ＤＮＡ?ｍａｋｅｒ；?１：?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔ?ｏｆ?ＭＡＰＫ２．重組質粒ｐＥＧＦＰ－ＭＡＰＫｌ的ＰＣＲ鑒定??以提取的重組....

圖３?ｐＥＧＦＰ－ＭＡＰＫｌ的雙酶切鑒定??Ｍ：?ＤＮＡ標記物；］：重組質粒經Ｈｉｎｄｌｌｌ和ＢａｍＨ?Ｉ雙酶切

?ｐＥＧＦＰ－ＭＡＰＫｌ的雙酶切鑒定??Ｍ：?ＤＮＡ標記物；］：重組質粒經Ｈｉｎｄｌｌｌ和Ｂ３?Ｄｉｇｅｓｔｅｄ?ｐｒｏｄｕｃｔｓ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｐＥＧＦＰ－ＭＡＰＫｌ??Ｍ：?ＤＮＡ?ｍａｋｅｒ；?１：?Ｔｈｅ?ｐｒｏｄｕｃｔｓ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｒｅｃｏＨ?Ｉ?．??組質粒ｐＥＧ....

圖４：?ＭＡＰＫ１基因片段的?

圖４：?ＭＡＰＫ１基因片段的ＢＬＡＳＴ比對結果??Ｆｉｇ．４?Ｔｈｅ?ＢＬＡＳＴ?ｒｅｓｕｌｔ?ｏｆ?ＭＡＰＫ１?ｇｅｎｅ?ｆｒａｇｍｅｎｔ??５．表達蛋白的熒光檢測??脂質體介導質粒轉染真核細胞ＨＥＫ２９３Ｔ，重組質粒組（ｐＥＧＦＰ－ＭＡＰＫｌ）和??空質粒組（ｐＥＧＦＰ－Ｃｌ....

圖５表達蛋白的熒光檢測??－－

脂質體介導質粒轉染真核細胞ＨＥＫ２９３Ｔ，重組質粒組（ｐＥＧＦＰ－ＭＡＰＫｌ）和??空質粒組（ｐＥＧＦＰ－Ｃｌ）經熒光顯微鏡可觀察到綠色熒光，而空白對照組無熒光呈??現(xiàn)，表明在真核細胞內該重組質�？捎行П磉_，見

本文編號：3911993