目的開展SmCaMK I(曼氏迭宮絳蟲鈣/鈣調(diào)素依賴蛋白激酶I)的潛在生物學特征分析和功能研究。方法利用相關(guān)網(wǎng)站和軟件對SmCaMK I的同源性核苷酸序列比對分析、保守位點預(yù)測、構(gòu)建分子進化樹、編碼氨基酸的淋巴細胞表位進行分析預(yù)測。此外,SmCaMK I進行擴增,并克隆到表達載體pET-28α(+)中進行蛋白的表達純化,制備大鼠免疫血清進行蟲體免疫組織定位分析。結(jié)果 SmCaMK I是一個全長基因,由1 068bp組成,編碼355個氨基酸。SmCaMK I與細粒棘球絳蟲、多房棘球絳蟲的CaMK I保守功能域的氨基酸序列一致性分別為89%和88%,與人的CaMK I氨基酸序列一致性僅僅只有44%。分子進化樹分析中SmCaMK I與絳蟲屬的親緣關(guān)系最近,與其他物種親緣性較遠。與人類CaMK I相比,淋巴細胞表位具有統(tǒng)計學差異。SmCaMK I能夠定位在成蟲的睪丸和蟲卵,在裂頭蚴中大量表達和特異定位于體表。結(jié)論SmCaMK I是參與蟲體生長發(fā)育繁殖的重要蛋白分子,還可能是一個潛在的疫苗靶標蛋白。

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圖１ＳｍＣａＭＫＩ同源氨基酸序列構(gòu)建系統(tǒng)進化樹Ｆｉｇ．１ＴｈｅｅｖｏｌｕｔｉｏｎｔｒｅｅｏｆＳｍＣａＭＫＩ

多房棘球絳蟲的ＣａＭＫＩ同源序列屬于同一進化分支，證明其親緣關(guān)系最接近；而與人類、鼠類、原核生物分布于不同的分支，在進化上說明親緣關(guān)系較遠。圖１ＳｍＣａＭＫＩ同源氨基酸序列構(gòu)建系統(tǒng)進化樹Ｆｉｇ．１ＴｈｅｅｖｏｌｕｔｉｏｎｔｒｅｅｏｆＳｍＣａＭＫＩ２．３淋巴細胞表位分析利用Ｂｅｐｉ....

圖２Ｂ淋巴細胞表位比對Ｆｉｇ．２ＴｈｅａｌｉｇｎｍｅｎｔｏｆＢｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｅｐｉｔｏｐｅｓ

７１、ａａ１９５－ａａ１９９、ａａ２０９－ａａ２１９、ａａ２３６－ａａ２４６、ａａ２６２－ａａ２６８、ａａ３５０－ａａ３５５）和５個Ｔ淋巴細胞表位（７７ａａ－８５ａａ、９３ａ－１０１ａａ、１７３ａａ－１８１ａａ、１８８ａａ－１９６ａａ、３２７ａａ－３３５ａａ）。將ＳｍＣａＭＫＩ與....

圖３Ｔ淋巴細胞表位比對Ｆｉｇ．３ＴｈｅａｌｉｇｎｍｅｎｔｏｆＴｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｅｐｉｔｏｐｅｓ

ａａ２６８、ａａ３５０－ａａ３５５）和５個Ｔ淋巴細胞表位（７７ａａ－８５ａａ、９３ａ－１０１ａａ、１７３ａａ－１８１ａａ、１８８ａａ－１９６ａａ、３２７ａａ－３３５ａａ）。將ＳｍＣａＭＫＩ與人類ＣａＭＫＩ抗原表位進行對比發(fā)現(xiàn)，Ｂ細胞表位重合率較高，但是對應(yīng)的編碼氨基酸差異較大，并....

圖６ＳｍＣａＭＫＩ蛋白的Ｈｉｓ識別和抗原性鑒定Ａ為Ｈｉｓ單克隆抗體識別；Ｂ為ＳｍＣａＭＫＩ蛋白免疫大鼠的免疫血清識別

ｏｎｏｆＳｍＣａＭＫＩ３討論ＣａＭＫＩ廣泛存在于各組織的細胞中，作為一個細胞內(nèi)級聯(lián)反應(yīng)的信號分子［２０］，其對于下游靶酶的磷酸化和對細胞周期的調(diào)控起著重要的作用，主要在細胞中參與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和調(diào)控細胞增殖。有研究Ａ為Ｈｉｓ單克隆抗體識別；Ｂ為ＳｍＣａＭＫＩ蛋白免疫大鼠的免疫血清識別。....

本文編號：3910833