目的:利用胰腺組織裂解液誘導(dǎo)BMSCs定向分化為胰島樣結(jié)構(gòu)。對胰島樣結(jié)構(gòu)進(jìn)行鑒定和初步評價,同時探討細(xì)胞分化、發(fā)育過程中,形態(tài)的變化與相關(guān)基因表達(dá)規(guī)律的關(guān)聯(lián)性。方法:使用胰腺組織裂解液做為誘導(dǎo)劑,構(gòu)建微環(huán)境,BMSCs做為種子細(xì)胞,構(gòu)建組織工程化胰島;倒置顯微鏡下觀察形態(tài)、結(jié)構(gòu)的變化。石蠟包埋組織切片HE染色觀察組織結(jié)構(gòu)、細(xì)胞分布;以DTZ染色篩選細(xì)胞團(tuán);Mallory染色初步檢定細(xì)胞成分;SEM、TEM觀察超微結(jié)構(gòu)。免疫熒光組織化學(xué)法檢測相關(guān)蛋白(胰島素、胰高血糖素、C肽、生長抑素、vEGF、vWF、Nestin、CK-19、Ⅰ型膠原蛋白、Ⅲ型膠原蛋白、Pdx-1、Ngn3、MafA)。根據(jù)細(xì)胞分化過程中的形態(tài)變化規(guī)律,將分化過程分為三個階段(Induced cells、Islet-like cells、Islet-like clusters),采用q RT-PCR檢測三個階段Pdx-1、Ngn3、MafA、Insulin、Glucagon。結(jié)果:1.組織工程化胰島具有結(jié)締組織樣被膜包裹,內(nèi)含α樣細(xì)胞、β樣細(xì)胞和δ樣細(xì)胞等胰島內(nèi)分泌細(xì)胞成分;結(jié)構(gòu)內(nèi)可見內(nèi)皮樣細(xì)胞;同時檢測到以Ⅰ型膠原...

【文章頁數(shù)】：98 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖3CD29、CD90、CD34、CD45流式細(xì)胞儀檢測Fig3FlowCytometrydetectionofCD29、CD90、CD34、CD45

圖3CD29、CD90、CD34、CD45流式細(xì)胞儀檢測Fig3FlowCytometrydetectionofCD29、CD90、CD34、CD45組織工程化胰島構(gòu)建--形態(tài)學(xué)觀察.1光鏡觀察使用胰腺組織裂解液作為誘導(dǎo)劑，定向誘導(dǎo)BMSCs。誘導(dǎo)第A），....

圖5細(xì)胞團(tuán)掃描電鏡圖

圖5細(xì)胞團(tuán)掃描電鏡圖Fig5SEMforinducedclusters3.2.3透射電鏡觀察透射電鏡觀察，內(nèi)分泌樣細(xì)胞可分為三種：第一種細(xì)胞（圖6-A），細(xì)胞內(nèi)可見圓形或細(xì)長狀線粒體，體積小，散在分布，大小不等、電子密度不一的分泌顆粒，數(shù)量多，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)呈囊管狀....

圖6透射電鏡Fig6TEMA-B:UltrastructureofIslet-likecells;cellnucleusshortforN,roughendoplasmicreticulumshortforER,mitochondriashortforM,zymogengranuleshortforZ,microvillishortforMV.C:Somesecondarylysosomescontainingasecretorygranulecorecanbeseen(a...

31圖6透射電鏡Fig6TEM-B:UltrastructureofIslet-likecells;cellnucleusshortforN,roughendoplasmicreticulumshortforEitochondriashor....

圖7細(xì)胞團(tuán)HE染色

織工程化胰島的構(gòu)建與初步評價2018屆碩士學(xué)位論文.3組織學(xué)技術(shù).3.1組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)技術(shù).3.1.1HE染色HE染色可見：胰島樣結(jié)構(gòu)組織切片中，細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰，排列緊質(zhì)呈腺樣分布,細(xì)胞核圓或橢圓，位于細(xì)胞中央，胞質(zhì)嗜酸性（圖胞團(tuán)被一層被膜包裹，被膜光滑，有游離....

本文編號：3892272