目的：本課題利用體外培養(yǎng)人臍靜脈內皮細胞(Human umbilical vein endothelial cells, HUVECS),觀察ANGⅡ處理下,細胞內JNK/c-Jun通路的激活情況,并 通過抑制JNK/c-Jun通路,觀察下游SREBP-1、DDAH-1蛋白質水平的變化及ADMA和NO水平的變化,從而探討JNK通路在ANG Ⅱ影響DDAH/ADMA/NOS系統(tǒng)中的作用,為闡明ANG Ⅱ引起NO水平變化提供新的視角。 方法：體外培養(yǎng)細胞株HUVECs,同步化處理后,加入不同濃度的ANG Ⅱ,孵育24小時,用Western blot檢測p-JNK, p-c-Jun表達水平的改變,從而觀察有無JNK/c-Jun信號通路的激活。以最大程度激活JNK/c-Jun通路的ANG Ⅱ處理濃度為最佳處理濃度。加入上述最佳處理濃度的ANG Ⅱ處理HUVECS不同時間,用Western blot檢測p-JNK, p-c-Jun表達水平的改變,找出可以最大程度激活JNK通路的ANG Ⅱ最佳處理時間。用以上最佳處理濃度與處理時間的ANG Ⅱ處理HUVECs,用Western Blot檢測p-c-...

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【學位級別】：博士

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摘要
ABSTRACT
符號說明
第一章 前言
第二章 材料與方法
    2.1 對象,試劑及儀器
        2.1.1對象：人擠靜脈內皮細胞株（HUVECS)購于中南大學細胞中心
        2.1.2試劑
        2.1.3主要試劑的配置
    2.2 方法
        2.2.1 人肪靜脈內皮細胞株（HUVECS)的培養(yǎng)
        2.2.2 實驗分組
        2.2.3 p-JNK/p-c-Jun 蛋白水平測定(Western Blotting)
        2.2.4 JNK阻斷劑SP600125處理HUVECS并分組
        2.2.5 Western blot 檢測細胞內 p-c-Jun，SREBP-1, DDAH-1 蛋白表達
        2.2.6 細胞培養(yǎng)液上清中ADMA的測定（高效液相色譜法）
        2.2.7 HUVECS中DDAH酶活性測定
        2.2.8 細胞培養(yǎng)液上清NO測定（銷酸還原酶法)
            2.2.8.1基本原理
            2.2.8.2 試齊ij
            2.2.8.3 操作過程
        2.2.9 統(tǒng)計學分析
第三章 結果
    3.1 不同濃度ANGⅡ處理下,HUVECS中JNK通路及下游C-JUN激活的情況
    3.2 不同ANGⅡ處理時間下,HUVECS中JNK通路及下游C-JUN激活的情況
    3.3 JNK抑制劑SP600125對HUVECS中SREBP-1的表達的影響
    3.4 JNK抑制劑SP600125對HUVECS中DDAH-1的表達的影響
    3.5 JNK抑制劑SP600125對HUVECS上清液中ADMA含量的影響
    3.6 JNK抑制劑SP600125對HUVECS中DDAH酶活性的影響
    3.7 JNK抑制劑SP600125對HUVECS上清液中NO含量的影響
第四章 討論
第五章 結論
參考文獻
綜述
    參考文獻
致謝



本文編號：3885958