潛伏性結(jié)核感染阻礙了宿主免疫系統(tǒng)對(duì)病原體的根除導(dǎo)致其成為結(jié)核桿菌主要儲(chǔ)存庫(kù)和結(jié)核病防治的障礙,因此診斷和預(yù)防潛伏性結(jié)核感染是如今結(jié)核病防治的關(guān)鍵。一組由休眠生存調(diào)節(jié)子(DosR)編碼的抗原對(duì)于結(jié)核桿菌在宿主體內(nèi)持續(xù)存在至關(guān)重要。近年來(lái)國(guó)內(nèi)外研究顯示出DosR抗原在潛伏感染的診斷和新型抗結(jié)核疫苗研發(fā)方面潛力巨大。本研究所選擇的抗原Rv1737c是DosR調(diào)節(jié)子的一種,主要由潛伏期的結(jié)核桿菌表達(dá),目前國(guó)內(nèi)外關(guān)于該抗原的報(bào)道較少,大部分功能未知。目的:探索DosR抗原Rv1737c在宿主天然免疫和炎癥調(diào)節(jié)中的作用及其機(jī)制,為新型抗結(jié)核疫苗的研究提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法:通過(guò)基因工程技術(shù)構(gòu)建重組質(zhì)粒pET30a(+)-Rv1737c,通過(guò)蛋白原核表達(dá)技術(shù)獲得重組蛋白R(shí)v1737c(rRv1737c)。用rRv1737c處理小鼠腹腔巨噬細(xì)胞和PMA誘導(dǎo)后的THP-1細(xì)胞。利用Western Blot技術(shù)和Real-Time PCR技術(shù)檢測(cè)經(jīng)過(guò)rRv1737c刺激后的巨噬細(xì)胞各效應(yīng)分子表達(dá)。通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)巨噬細(xì)胞表面共刺激分子表達(dá),ELISA技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞上清中各細(xì)胞因子濃度,探索rRv1737c在巨...

【文章頁(yè)數(shù)】：68 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
前言
    1.1 機(jī)體對(duì)結(jié)核桿菌的識(shí)別
    1.2 結(jié)核感染的T細(xì)胞免疫應(yīng)答
    1.3 潛伏性結(jié)核感染
    1.4 結(jié)核桿菌的免疫逃避
    1.5 BCG疫苗的局限性和DosR抗原的研究展望
第一章 載體構(gòu)建和重組蛋白R(shí)v1737c的表達(dá)純化
    一、材料與方法
        1.1 主要材料和試劑
        1.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器
        1.3 實(shí)驗(yàn)方法與步驟
    二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.1 重組質(zhì)粒pET30a(+)-Rv1737c的構(gòu)建和鑒定
        2.2 重組蛋白的表達(dá)純化和鑒定
    三、討論
第二章 rRv1737c誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞活化的機(jī)制研究
    一、材料與方法
        1.1 主要材料和試劑
        1.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器
        1.3 實(shí)驗(yàn)方法與步驟
        1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.1 rRv1737c誘導(dǎo)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞聚集和TLR2表達(dá)
        2.2 rRv1737c誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞TLR2表達(dá)上調(diào)和NF-κB磷酸化增加
        2.3 rRv1737c上調(diào)巨噬細(xì)胞表面共刺激分子表達(dá)
        2.4 rRv1737c誘導(dǎo)炎癥因子分泌
        2.5 rRv1737c誘導(dǎo)IDO1分子表達(dá)上調(diào)
    三、討論
第三章 rRv1737c的免疫和保護(hù)效果評(píng)價(jià)
    一、材料與方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.2 主要實(shí)驗(yàn)材料和試劑
        1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器
        1.4 實(shí)驗(yàn)步驟與方法
        1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.1 rRv1737c免疫原性
        2.2 rRv1737c對(duì)小鼠免疫調(diào)節(jié)及其肺部組織病理?yè)p傷評(píng)價(jià)
        2.3 rRv1737c調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞聚集和表型
        2.4 rRv1737c激活的巨噬細(xì)胞在體外實(shí)驗(yàn)中誘導(dǎo)Treg和Th2表型
        2.5 rRv1737c免疫小鼠在高劑量BCG感染后T細(xì)胞分泌IFN-γ、IL-4和IL-4和IL-10水平
        2.6 rRv1737c免疫小鼠的肺部免疫應(yīng)答
    三、討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
在學(xué)期間的研究成果
致謝



本文編號(hào)：3864819