第一部分噬菌體展示HIV-1 Tat38-61(51N/55N)堿性區(qū)突變體庫(kù)的構(gòu)建 目的用噬菌體展示的方法構(gòu)建Tat38-61(51N/55N)堿性區(qū)突變體文庫(kù),進(jìn)一步研究HIV-1 Tat38-61表位的分子進(jìn)化篩選。方法采用含隨機(jī)核苷酸序列的引物,通過(guò)Overlap PCR的方法獲得51和55位氨基酸隨機(jī)突變的全長(zhǎng)Tat編碼序列,再以此為模板PCR擴(kuò)增出兩端含有Xba I識(shí)別序列的Tat38-61突變體片段HIV-1 Tat38-61(51N/55N),克隆至噬菌體展示載體pCANTAB5S上,轉(zhuǎn)化大腸桿菌TG1,經(jīng)M13K07輔助噬菌體拯救,構(gòu)建噬菌體展示Tat38-61(51N/55N)堿性區(qū)突變體文庫(kù)。結(jié)果成功構(gòu)建噬菌體展示Tat38-61(51N/55N)堿性區(qū)突變體文庫(kù),結(jié)果顯示文庫(kù)的庫(kù)容量為5.0×10⁶,滴度為2.65×10¹² TU/ml,陽(yáng)性克隆率為56.50%;序列分析顯示文庫(kù)中51、55位核苷酸與氨基酸均呈隨機(jī)性分布。結(jié)論所建文庫(kù)達(dá)到進(jìn)行分子進(jìn)化篩選的要求,為獲得可用作疫苗候選物的新型Tat突變體奠定基礎(chǔ)。 第二部...

【文章頁(yè)數(shù)】：63 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

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縮略詞表
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分：HIV-1 Tat38-61(51N/55N)堿性區(qū)突變體文庫(kù)的構(gòu)建
    1 材料與方法
    2 結(jié)果
    3 討論
    4 結(jié)論
第二部分：HIV-1 Tat38-61(51N/55N)堿性區(qū)突變體文庫(kù)的親和篩選
    1 材料與方法
    2 結(jié)果
    3 討論
    4 結(jié)論
第三部分：HIV-1 Tat38-61(51N/55N)突變體蛋白的構(gòu)建表達(dá)
    1 材料與方法
    2 結(jié)果
    3 討論
    4 結(jié)論
總結(jié)
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
綜述
    參考文獻(xiàn)



本文編號(hào)：3860322