輪狀病毒是引起嬰幼兒及多種幼齡動物腹瀉的主要病原體,其感染是一個多受體介導的、多步驟的復雜過程。刺突蛋白VP4對胰酶敏感,可以被胰酶酶切形成VP8*和VP5*蛋白,進而激活輪狀病毒的感染。在輪狀病毒的感染過程中,VP8*與VP5*蛋白分離才能夠暴露出VP5*蛋白的膜融合區(qū)域,進而介導輪狀病毒的入胞過程。冰凍電鏡的三維重構結果顯示:胰酶酶切后,VP8*蛋白仍位于VP5*蛋白的頂端,并通過一段柔性肽與插入基座部分的N端α螺旋相連,維持VP4蛋白結構的穩(wěn)定性。但是,VP8*與VP5*蛋白相互作用及其在輪狀病毒感染過程中的解離機制目前尚不明確。本課題組前期研究中發(fā)現(xiàn),重組表達的羊輪狀病毒VP4*蛋白(aa 26-476)免疫小鼠后可以抑制輪狀病毒感染導致的排毒和腹瀉,并且與天然病毒中的VP4蛋白性質類似,可以被胰酶酶切形成VP8*和VP5*蛋白,為我們研究VP8*和VP5*蛋白之間的相互作用及解離機制奠定了基礎。我們首先通過分子對接方法,對輪狀病毒VP4蛋白的已有結構進行分析,發(fā)現(xiàn)VP8*蛋白在α螺旋之外的區(qū)域與VP5*蛋白可能存在相互作用。在此基礎上,我們進一步通過蛋白截短和氨基酸定點突變,...

【文章頁數(shù)】：90 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞(Abbreviation)
第一章 前言
    1. 輪狀病毒的形態(tài)結構與性質概述
    2. 輪狀病毒的基因組概述
    3. 輪狀病毒蛋白的結構與功能概述
        3.1. 輪狀病毒的結構蛋白
        3.2. 輪狀病毒的非結構蛋白
    4. 輪狀病毒的分類及流行病學分析
        4.1. 輪狀病毒的分類
        4.2. 輪狀病毒的流行趨勢
    5. 輪狀病毒的感染機制
        5.1. 輪狀病毒的吸附
        5.2. 輪狀病毒的內吞
        5.3. 輪狀病毒進入胞質
    6. 本研究目的及意義
第二章 材料與方法
    1. 材料
        1.1. 主要儀器設備
        1.2. 菌種和質粒
        1.3. 病毒和細胞
        1.4. 常用試劑
    2. 方法
        2.1. 常用試劑及培養(yǎng)基配制
        2.2. 常規(guī)分子生物學實驗
        2.3. 常規(guī)細胞生物學實驗
        2.4. 蛋白純化及性質鑒定實驗
        2.5. 密度梯度離心檢測實驗
        2.6. ELISA檢測實驗
第三章 結果與分析
    1. VP8^*與VP5^*蛋白相互作用研究體系的建立
        1.1. VP8^*與VP5^*蛋白的表達純化
        1.2. VP8^*與VP5^*蛋白相互作用檢測體系的建立
        1.3 小結
    2. VP8^*與VP5^*蛋白相互作用機制研究
        2.1. 基于結構分析VP8^*與VP5^*蛋白相互作用
        2.2. VP8^*蛋白N端截短對VP8^*與VP5^*蛋白相互作用的影響
        2.3. VP8^*與VP5^*蛋白相互作用關鍵氨基酸的研究
        2.4. 小結
    3. VP8^*與VP5^*蛋白解離機制的研究
        3.1. 唾液酸受體對VP8^*與VP5^*蛋白相互作用的影響
        3.2. 不同pH對VP8^*與VP5^*蛋白相互作用的影響
        3.3. 胞內蛋白酶對VP8^*與VP5^*蛋白相互作用的影響
        3.4. 受體、pH、蛋白酶聯(lián)合對VP8^*與VP5^*蛋白相互作用的影響
        3.5. 小結
第四章 討論
    1. VP8^*與VP5^*蛋白相互作用機制及其關鍵氨基酸
    2. VP8^*與VP5^*蛋白解離機制及其與病毒釋放關系
    3. ELISA作為相互作用及解離機制檢測方法的局限性
第五章 總結與展望
參考文獻
致謝



本文編號：3819886